紫外分光光度计测VC.doc

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1、紫外分光光度法测定蓝莓中的维生素C含量（一）实验目的(1)掌握紫外分光光度计的工作原理及使用方法。(2)掌握水果（或蔬菜）中的维生素C含量的测定方法。（二）实验原理紫外分光光度快速测定法是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性,于波长243nm处测定样品溶液与碱处理样品两者吸光度之差,通过查校准曲线,即可计算样品中维生素C的含量。此法操作简单、快速准确、重现性好,结果令人满意。特别适合含深色样品的测定。（三）仪器与试剂仪器分析天平，蓝莓若干，研钵，容量瓶（10ml,50ml,100ml）,滤纸，漏斗，5ml移液管试剂抗坏血酸标准溶液：用分析天平准确称取抗坏血酸10mg，加2

2、mL1%盐酸，加蒸馏水定容至100mL，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100μg·mL-1（四）实验步骤1.标准曲线的绘制试管标号12345678标准VC加入体积/ml0.10.20.30.40.50.60.81.0蒸馏水9.99.89.79.69.59.49.29.0VC溶液浓度/(ug/ml)1.02.03.04.05.06.08.010.02样品的测定1．样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00g于研体中，加入2～5mL1%HCl，匀浆，转移到25mL容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（10000g,10min）来

3、消除。2．样品的测定：取0.1～0.2mL提取液，放入盛有0.2～0.4mL10%盐酸的10mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在243nm处测定其消光值。通过查标准曲线，计算出样品的维生素C的含量。（五）计算与数据            μ×V总维生素C的含量（μg/g）=————             V1×W总式中：μ——从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量　　　　　　（μg）　　　V1——测消光值时吸取样品溶液的体积（mL）　　　V总——样品定容体积（mL）　　　W总——称样重量（g）数据见excel表（六）思考与讨论除了本实验中的方法外，抗坏血酸还有哪些测

4、定方法?答：一、氧化还原法　　1.直接碘量法　　2.2,6-二氯酚靛酚滴定法　　二、分光光度法　　1.紫外快速测定法　　2.2,4-二硝基苯肼法　　3.高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸　　三、光电比浊法　　四、电化学法　　五、荧光分析法　　1.抗坏铁酸的微量荧光测定法　　2.抗坏铁酸总量的荧光测定法