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时间:2020-04-10
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1、紫外分光光度法测定蓝莓中的维生素C含量(一)实验目的(1)掌握紫外分光光度计的工作原理及使用方法。(2)掌握水果(或蔬菜)中的维生素C含量的测定方法。(二)实验原理紫外分光光度快速测定法是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性,于波长243nm处测定样品溶液与碱处理样品两者吸光度之差,通过查校准曲线,即可计算样品中维生素C的含量。此法操作简单、快速准确、重现性好,结果令人满意。特别适合含深色样品的测定。(三)仪器与试剂仪器分析天平,蓝莓若干,研钵,容量瓶(10ml,50ml,100ml),滤纸,漏斗,5ml移液管试剂抗坏血酸标准溶液:用分析天平准确称取抗坏血酸10mg,加2
2、mL1%盐酸,加蒸馏水定容至100mL,混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100μg·mL-1(四)实验步骤1.标准曲线的绘制试管标号12345678标准VC加入体积/ml0.10.20.30.40.50.60.81.0蒸馏水9.99.89.79.69.59.49.29.0VC溶液浓度/(ug/ml)1.02.03.04.05.06.08.010.02样品的测定1.样品的提取:将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00g于研体中,加入2~5mL1%HCl,匀浆,转移到25mL容量瓶中,稀释至刻度。若提取液澄清透明,则可直接取样测定,若有浑浊现象,可通过离心(10000g,10min)来
3、消除。2.样品的测定:取0.1~0.2mL提取液,放入盛有0.2~0.4mL10%盐酸的10mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白,在243nm处测定其消光值。通过查标准曲线,计算出样品的维生素C的含量。(五)计算与数据 μ×V总维生素C的含量(μg/g)=———— V1×W总式中:μ——从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量 (μg) V1——测消光值时吸取样品溶液的体积(mL) V总——样品定容体积(mL) W总——称样重量(g)数据见excel表(六)思考与讨论除了本实验中的方法外,抗坏血酸还有哪些测
4、定方法?答:一、氧化还原法 1.直接碘量法 2.2,6-二氯酚靛酚滴定法 二、分光光度法 1.紫外快速测定法 2.2,4-二硝基苯肼法 3.高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸 三、光电比浊法 四、电化学法 五、荧光分析法 1.抗坏铁酸的微量荧光测定法 2.抗坏铁酸总量的荧光测定法
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