细胞培养基础.doc

《细胞培养基础.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、细胞培养基础［转】组织（细胞）培养发展史年鉴1878QaudeBernard:证明一个器官的生理系统在个体死亡以后仍然可以人工维持。1885WilhelmFtoux:在一个生理溶液中维持一快鸡胚的活性并观察其发育，从而证实该发育与鸡胚的其他部分无关。1887FtossHarrison:利用凝固的青蛙淋巴液作为培养基，在体外培养青蛙神经畸，维持其活性达数星期，并观察到了神经纤维的生长，从解决了神经纤维的来源问题。RossHarrison被人称为细胞培养Z父。1910Burrows:率先在血浆凝块中长期培养鸡胚细胞.1911Lewis&

2、Lewis:由海水、血清、胚胎提取物和盐和蛋白豚为原料配制成了第一个人工的细胞培养液，并观察到了单层细胞的有限生长。1916Ftous&Jones:开创使用胰酶来收获贴壁生长的细胞。1923-1931Carrel&Baker:研制T型培养瓶人规模培养细胞。1927Carrel&Rivera:制造了第一个病毒疫苗：牛痘疫苗。1933Gey:发明了转管培养细胞的技术。1948Fsher:研制成了笫一个化学成分清处的细胞培养液CMRL1006,该培养液至今还在使用。1952Gey和同事：分离培养了Hela细胞。1952Dulbecco:发

3、明了噬斑法，用长满的单层细胞检测病毒。1954Abercrombie:观察到了体外培养细胞接触抑制的现象。1961Hatflick&Moorhead:显示人成纤维细胞在一定的代数Z后会死亡。1965Ham:配制了笫一个无血清培养液。1975Kohler&Miltein:成功的得到了第一个用于单抗生产的杂交瘤细胞株。怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件?ATCC（AmericanTypeCultureCollection）收集了绝人多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cellsandhybridomas链接,输入细胞名称就可以

4、搜索ATCC的细胞数据库。数据库中有每一种细胞的详细描述，包括细胞的来源，培养和冻存条件，以及相关文献等资料。为什么人多数细胞培养需要用二氧化碳培养箱？一般细胞培养液的pH在7.0-7.4Z间。由于碳酸盐pH缓冲系统是一种住理pH缓冲系统（它是人体血液中最重要的pH缓冲系统），大多数培养液用它来保持稳定的pH.用粉末配制培养液时，常常需要加入一定量的碳酸氢钠。对大多数以碳酸盐作为pH缓冲系统的培养液而言，以为了维持稳定的pH,培养箱屮的二氧化碳需要维持在2-10%之间，以保持培养液屮溶解的二氧化碳的浓度。同时细胞培养的器皿需要一定程

5、度的透气，以便于气体的交换。是不是采用其他pH缓冲系统就不需要二氧化碳培养箱了呢？人们发现由丁•空气屮的二氧化碳浓度很低，如果细胞不在二氧化碳培养箱中培养，培养液中的HCO3■会被耗尽，这样会影响细胞的正常生长。所以大部分动物细胞的培养，还是需要二氧化碳培养箱。细胞培养液中常附加其他的pH缓冲系统，比如HEPES缓冲系统,来增加pH缓冲能力。HEPES在pH7.2-7.4Z间冇很强的缓冲能力，当透气的培养器皿被拿到二氧化碳培养箱外面的时候，由于空气屮二氧化碳浓度很低，培养液屮碳酸盐缓冲系统就会失去效果，这时候HEPES缓冲系统就能继

6、续保持pH的稳定。为什么培养的细胞耍及时传代？体外培养的细胞人多具有生长接触抑制的特性，也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候，它就会停止生氏。当细胞铺满培养器皿的表面时，正常的细胞停止生长，但是转化（即发生遗传物质突变）的对接触抑制不敏感的细胞会继续生长。如果不及时传代，这些转化的细胞就会逐步取代正常的细胞。二氧化碳培养箱的挑选和使用由于动物细胞培养液一般使用碳酸盐pH缓冲系统，要求培养环境屮维持一定浓度的CO2,所以动物细胞的培养-•般需要CO2培养箱。C02培养箱采用两种不同的CO2维持系统。一种方式是通过使用空气泵，将CO2

7、和空气按一定比例混合后吹入培养箱。另一•种方式是通过一个自动的C02检测控制系统，在检测到CO2浓度低于要求浓度时打开CO2气阀充入CO2o由于前一种方法耗费CO2而且不容易精确控制CO2浓度，先进的CO2培养箱都采用自动监控系统来维持CO2的浓度。配有白动002检测控制系统的培养箱需要根据牛产厂家的说明，定期做C02浓度的测试和矫正。002培养箱的隔热采用水套式和气套式两种类型。水套式需要用户在安装培养箱时培养箱壁的空间内灌入大量蒸僻水。由于水的比热容很高，水套式的优点是有助于均匀散热和避免形成冷区，以及衣断电麻能够比较好的减缓培

8、养箱内温度的降低。它的缺点是由于灌入大量的水，培养箱变得非常沉重，不易搬动。有效的隔热系统和先进的表面散热元件的使用使气套式培养箱兼备了轻便性和水套式培养箱的优点，所以新型的C02培养箱大多采用气套式。目询大多数实验宗都使用进口的细胞