实验10 几种常用培养基的制备及高压蒸气灭菌和干热灭菌.doc

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1、实验10几种常用培养基的制备及高压蒸气灭菌和干热灭实验十几种常川培养基的制备及高压蒸汽灭菌和干热灭菌杨明轩生物1111102040128一、实验目的1、学习并掌握常川培养基的制备方法。2、学习并掌握高压蒸气灭菌和干热灭菌的原理及方法。二、实验原理培养基是一种人丁配制的适合微生物生长繁殖并积累代谢产物的混合养料，通常包含碳源、氮源、无机盐、生长因子和水六人类营养成分。就具营养物而言，可分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基。就用途而言，可分为基础培养基、加富培养基、鉴别培养基以及选择培养基。其屮，牛肉膏蛋门腺培养基、马铃薯培养基及高氏一号培养基是儿种常用的培

2、养基，它们分别用來培养细菌、真菌以及放线菌。前两者属于天然培养基，后者是合成培养基。牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物，含有丰富的营养物质，可提供碳源、氮源及多种维生索；蛋门腺是酪蛋门、人豆蛋门或鱼粉蛋门酶水解后的屮间产物，富含营养；马铃薯浸液同样也是丰富的氮源物质以及多种维生索。高压蒸汽灭菌是实验室常用的灭菌方法，适用于培养基、生理盐水、各种缓冲液以及玻璃器皿的灭菌。常用高压蒸汽锅进行灭菌，原理是通过提高灭菌锅内的蒸汽温度以达到灭菌的H的。当蒸汽压为1.05kg/cm2时，锅内温度达到121.3°C,在该温度下保持20-30min即可杀灭所有微主物及芽抱。灭菌所需时

3、间和温度取决于被灭培养基中营养物的耐热性、容器体积大小及装物量等因索。干热灭菌常用于玻璃器血的灭菌，常用电热烘箱进行。干热灭菌主要是利用高温使微牛物细胞内的蛋门凝固变性而达到灭菌的作用。细胞内蛋门质凝固性与自身含水率有关，当菌体受热时，环境和细胞含水率越人，蛋门凝固越快。常在160-170°C条件下维持2h即可进行彻底灭菌。三、实验材料1、试剂：牛肉膏、蛋刚东、蔗糖、可溶性淀粉、马铃薯、NaCl>KNO3、K2HP04・3H2O、MgS04・7H20、FeSO4・7H20、琼脂、lmol/LNaOH.lmol/LHC1、无菌水；2、器皿:台式天平、2000m

4、l搪瓷锅、500ml烧杯、500ml三角瓶、500ml>1000ml量筒、漏斗、玻璃棒、15X150mm试管、lml>10ml吸管、滴管;3、仪器：立式高压蒸汽灭菌锅、于提式高压蒸汽灭菌锅、电热烘箱;4、其它：pH试纸、药勺、滤纸、防潮纸、纱布、棉花、线绳。四、实验方法（1）制备牛肉膏蛋门腺培养基按照下表1称量各药品。用量筒取900ml蒸僻水与搪瓷锅屮，加入各药品至全部溶解，补水定容至1000mlo然后用lmol/LNaOH调pH到7.1。趁热分装，5个500ml三角瓶,每瓶300ml,并加3.4g琼脂粉。加塞，包扎，做好标记，准备灭菌。（2）制备马铃薯培养

5、基按照下表1称量各药品。将洗净去皮的马铃薯切成lcm3的小块置于搪瓷锅屮，加入900讷蒸馄水煮沸15min,然后用4层纱布过滤，加入蔗糖至全部溶解，补水定容至1000mlo然后用lmol/LHC1调pH到6.5。趁热分装,5个500ml三角瓶，每瓶300ml,并加3.4g琼脂粉。加塞，包扎，做好标记，准备灭菌。（3）制备高氏1号培养基按照下表1称量各药品。先川少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少量沸水并加热使淀粉充分溶解，加入900ml蒸錨水，加入其他药品至全部溶解，补水定容至1000ml。然后用lmol/LNaOH调pH到7.3。趁热分装,5个500ml三角瓶

6、,每瓶300ml,并加3.4g琼脂粉。加塞，包扎，做好标记，准备灭菌。（4）无菌水的制备将蒸憎水分装于200ml三角瓶中,每瓶内含20-30粒玻璃珠,每瓶90mlo5X150mm试管屮装9ml蒸馅水，7支-■捆，包好后准备灭菌。1（5）高压蒸气灭菌1、加水：向灭菌锅夹层加蒸馆水至适当水位刻度；2、装料：放入需灭菌的物品；注意：装量适当，使瓶口或试管口向中心摆放，不要紧贴锅内壁，以防冷凝水沾湿棉塞3、加盖：盖好灭菌锅，对称拧好螺栓；4、灭菌：通电加热，待火菌锅排出人股水蒸汽时记时15分钟后，关闭排气阀。继续加热至所需条件,如压力达1.05kg/cm2即121.

7、3°C,维持20-30分钟；5、降压：灭菌后立即关闭电源，待压力降至0时，打开排气阀，放空剩余蒸汽。再打开锅盖，取出灭菌物品；6、后处理：灭菌完毕，放空夹层内的水，保持锅内干净。（6）干热灭菌1、装料：打开烘箱门，放入需灭菌的物品,关好烘箱门；（注意：勿使纸包物品紧靠烘箱壁，以免引起火灾！）；2、灭菌：打开排气孔，接通电源，加热升温至160C,关闭排气孔，维持2小时；（注意：灭菌温度绝对不可以超过18LC）3、降温：灭菌后，立即关闭电源，将温度旋钮转至-待温度降至20C以下吋，打开烘箱门，取出灭菌物品。六、思考题1、制好培养基后为什么必须立即灭菌？如何检查灭

8、菌后的培养基是无菌的？答：新11!制的培养基小营养物