microbe-10+培养基的制备和高压蒸汽灭菌

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1、实验十培养基的制备和高压蒸汽灭菌一、目的要求1.学习培养基配制的一般方法；2.学习高压蒸汽灭菌的原理和方法。二、基本原理培养基是人工地将多种物质按各种微生物生长的需要配制而成的一种混合营养基质，用以培养或分离各种微生物。因此，营养基质应当有微生物所能利用的营养成分（包括碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素）和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气

2、阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。三、器材牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、HCl、NaOH等；烧杯、玻璃棒、漏斗、试管、硅胶塞、吸量管、牛皮纸、胶圈、脱脂棉、培养皿、铁架台、电炉、天平、记号笔、手提式高压蒸汽菌锅等。牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（用于分离和培养细菌，是一种天然培养基）配方如下：牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠3g琼脂20g自来水1000mLpH7.2~7.4灭菌1.05kg/

3、cm2，25~30min四、操作步骤(一)培养基的配制。四、操作步骤（续）(二)高压蒸汽灭菌1．首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。2．放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入硅胶塞。3．加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。4．用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷

4、空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用1．05kg/cm2，121．3℃，20分钟灭菌。5．灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。6．将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养2

5、4小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。五、思考题1.固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问题？2.培养基中加琼脂的作用是什么？3.如何检查培养基灭菌是否彻底？