AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程.doc

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1、.文件名称AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程使用维护标准操作规程颁发部门制订人：复核人：批准人：质保部制订日期：复核日期：批准日期：执行日期版本1.0编号SOP04006制作份数_____份发送部门修订记录修订人修订原因修订内容版本修订日期1.目的：确保荧光定量PCR仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。2.范围：适用于AB7500荧光定量PCR仪的使用及维护。3.定义：无4.职责：荧光定量PCR仪使用人员负责本规程的实施。质保部对本规定的有效执行承担监督检查责任。5.内容：5.1室内温度控制在15～30℃，

2、相对湿度45～75%。5.2仪器操作5.2.1依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows界面。5.2.2接着打开AB7500仪器电源开关，预热10分钟。5.2.3点击7500Softwarev2.3图标，打开软件。5.2.4按压仪器托盘上的按压位，待托盘弹出后，将所需检测的8联PCR反应管或者96孔PCR反应板放入检测孔位，记下放置位置。检测8联PCR反应管用**反应孔模块，检测96孔PCR反应板用**反应孔模块。（检测8联PCR反应管需放入盖紧管盖的空8联PCR反应管配平，检测96孔PCR反应板无需配平）..5.2.5再次按压托盘使其

3、滑入仪器。5.2.6新建扩增参数模板：例如新建一个UG-63-62的模板，扩增参数是95°，10′；（95°，10″；63°，45″）×5cycles；（95°，10″；62°，35″）×40cycles，在62°时收集荧光信号（HEX、FAM信号），20μl反应体系。5.2.6.1在Setup-PlateSetup-DefineTargetsandSamples中，将TargetName下的Target1改成FAM；点击AddNewTarget，将新增的Target1改成HEX，点击Reportee下拉菜单，选择VIC。5.2.6.2在Setup-R

4、unMethod-GraphicalView中的ReactionVolumePerWell后面输入20（20μl反应体系）。选中第一个HoldingStage，点击DeleteSelected删除；在CyclingStage中的NumberofCycles后输入5，在Step1中输入时间10秒，在Step2中输入温度63度，输入时间45秒，将63度下面收集荧光图标点掉；点击AddStage下拉菜单选择Cycling，在CyclingStage中的NumberofCycles后输入40，在Step1中输入时间10秒，在Step2中输入温度62度，输入时间

5、35秒，在62度下面点击图标收集荧光。5.2.6.3点击Save下拉菜单下的SaveAsTamplate，文件名输入UG-63-62，保存在默认ab7500-config-tamplates文件夹内，关闭设置界面。5.2.7已有扩增参数模板：在软件Home界面中点击Template，选择需要的模板，点击打开。例如：UG-63-62，其扩增参数就是95°，10′；（95°，10″；63°，45″）×5cycles；（95°，10″；62°，35″）×40cycles，在62°时收集荧光信号（HEX、FAM信号），ReactionVolumePerWell

6、:20μl（20μl反应体系）。5.2.8在Setup-PlateSetup-AssignTargetsandSamples中选择8联管摆放的位置，全部勾选Sample1；UGT1A1*6勾选HEX，UGT1A1*28勾选FAM。5.2.9在Run-AmplificationPlot中点击STARTRUN，命名为20140101-1（当日日期+当日上机次数，例:2014年1月1日第1次上机编号为20140101-1），保存在默认文件夹中，开始运行。5.2.10结果分析5.2.10.1PCR反应结束后自动保存结果，对扩增曲线进行分析。5.2.10.2也可

7、根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以（用户可根据实际情况自行调整，Start值可以在3～15、End值可设在5～20），Threshold值（Rn）推荐设定为5000～15000，点击Analyze进行分析，然后到Plate窗口下记录每个反应的Ct值。5.2.11实验结束后取出反应管（切勿打开管盖），顺序关闭AB7500软件、定量PCR仪电源，关闭电脑。5.3仪器维护5.3.1每周维护5.3.1.1检查计算机磁盘空间。如需要，将实验文件归档或备份。..•至少每周检查一次计算机磁盘空间。•如果硬盘的可用空间不足其总容量的20%，应

8、将较陈旧的数据传输到备份存储设备上保存。5.3.1.2关闭控制7500Instrument的计