普通PCR仪和荧光定量PCR仪的使用

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1、二○一二年十二月普通PCR仪和荧光定量PCR仪的使用PartI中心PCR(polymerasechainreaction)仪简介PartIIPCR原理PartIII普通PCR仪操作规程PartⅣ荧光定量PCR原理PartⅤ荧光定量PCR仪操作规程PartI中心PCR仪简介荧光定量PCR仪Rotorgene3000普通PCR仪GeneAMPSystem9700PartIIPCR原理AAAA蛋白/酶DNAmRNA蛋白中心法则基因表达转录水平翻译水平基因水平（Realtime）RT-PCRWesternblotPCR核酸的功能是储存和转移遗传信息，指导和控制蛋白质的合成；而蛋白质的主要功能是进行新陈

2、代谢活动和作为细胞结构的组成成分。PCR概念利用DNA聚合酶、一对引物和四种dNTP（三磷酸脱氧核苷酸），对模板DNA反复多次地进行复制，从而得到大量扩增产物的反应过程，称为PCR。PartIIPCR原理PartIIPCR原理PCR反应五要素引物（primer）酶（TaqDNApolymerase）dNTP（dATP,dGTP,dCTP,dTTP）Mg2+（magnesium）模板（template）PartIIPCR原理PCR扩增的基本反应步骤1、变性：加热至95ºC左右，使模板DNA变性。2、退火：降低温度至适合的温度（55ºC左右，引物与模板DNA的互补序列配对结合。3、延伸：温度在70

3、ºC左右时，TaqDNA聚合酶从引物3'端催化复制链以5'-3'方向延伸。1234522557294时间（min）温度（℃）适温延伸3高温变性1低温退火2重复1-3步25-30轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性形成2条单链子链延伸DNA加倍PartIIPCR原理PartIIPCR原理PCR原理PCR的理论方程：Y=x×(1+Ev)nY：扩增物数量；X：起始模板数量；Ev：扩增效率；n：扩增循环数PartIII普通PCR仪操作规程开机操作：打开PCR仪电源开关；向后平推PCR仪顶盖，放入PCR薄壁管。向前平推PCR仪顶盖，并均匀用力将反扣部分压下。注意：

4、9700PCR仪必须使用圆头的PCR薄壁管。PCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程GeneAmpPCRSystem9700Version3.05User:***RunCreatEditUtilUserF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStopPCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程SelectUserName<

>cqllyf……AcceptNewEditDeleteCancelF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStopPCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程UserName___UseE
5、NTERkeytoselectacharacter.AcceptBackspCancelF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStopabcdefghijklmnopqrstuvwxyzPCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程MethodsizelastusedExp000qin0903/01/06Exp001qin1904/10/06StartViewUserSortCancelF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStopPCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程StartReturnF1F1F2F3F4F5147Ent
6、er2580369CEStop1Hld3Tmp35Cycles2Holds94.03:0094.00:2055.00:2072.00:2072.07:004.08PCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程MethodsizelastusedExp000qin0903/01/06Exp001qin1904/10/06EditViewUserSortCancelF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStopPCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程EditReturnF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStop1Hld3Tmp3
7、5Cycles2Holds94.03:0094.00:2055.00:2072.00:2072.07:004.08关机操作：实验结束后点击Exit至出现主界面，关闭PCR仪电源开关；均匀用力将反扣部分抬起，向后平推PCR仪顶盖，取出PCR薄壁管。向前平推PCR仪顶盖。PartIII普通PCR仪操作规程首先，传统的PCR检测方法在测定PCR扩增产物前需打开反应管，容易造成产物污染，成为“假阳性”的主