p38MAPK和TNF-α mRNA在冠心病患者冬眠心肌中的表达和意义.doc

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1、P38MAPK和TNF-amRNA在冠心病患者冬眠心肌中的表达和意义【摘要】目的探讨冬眠心肌细胞内P38MAPK、TNF-amRNA的变化和意义。方法10例行冠状动脉搭桥术的冠心病患者，术前1周内用多巴酚丁胺超声负荷试验结合多普勒组织成像确定冬眠心肌及止常心肌的位置，搭桥术屮根据检测结果进行取材(分别取正常心肌和冬眠心肌)，并经电镜证实。Western-blot法检测p38MAPK蛋白表达情况，原位杂交法检测TNF-amRNA的活性。结果冬眠心肌细胞内p38MAPK、TNF-amRNA的表达较正常细胞高；冬眠心肌p38

2、MAPK与TNF-cimRNA表达相关(r=0.849,P<0.05)o结论慢性缺血缺氧时，心肌细胞内p38MAPK、TNF-amRNA表达增加。TNF-amRNA促进p38MAPK的活化，P38MAPK.TNF-a是冬眠心肌形成的重耍分子生物学因子。【关键词】冬眠心肌肿瘤坏死因子aP38MAPKAbstract:ObjectiveTostudythechangesandsignificanceofp38MAPKandTNF-cimRNAinhibernatingmyocardium(HM)・MethodsTenpat

3、ientswithcoronaryarterydiseasescheduledforbypasssurgeryweresubjectedtopreoperativedobutaminestressechocardiographyandDopplertissueimagetolocatethepositionofHM.Thespecimensofnornialniyocardiuni(NM)andHMweretakenduringtheoperation,andthenconfirmedbyelectroninicros

4、copy.p38MAPKandTNF-amRNAweredetectedbyusingWesternblotandinsituhybridizationrespectively.ResultsTheexpressionsofp38MAPKandTNF-mRNAinHMweresignificantlyincreased,comparedwiththatinNM.p38MAPKandTNF-cimRNAwerepositivelycorrelated(r=0.849,P<0.05)・ConclusionTheexpres

5、sionsofp38MAPKandTNF-cimRNAareincreasedinischemicmyocardialcel1s.AsTNF-amRNApromotestheactivationofp38MAPK,theytwomaybeimportantfactorsinthemolecularbiologyofHMformation.Keywords:hibernatingmyocardium;TNF-a;p38MAPK冬眠心肌(hibernatingmyocardium,HM)是由慢性冠状动脉缺血引起、能够保存残

6、余收缩储备力因而对性肌力刺激起阳性反应的一种心肌的特殊状态，通过增加血流或降低氧耗，其功能可部分或完全恢复。HM是心肌功能为适应降低的血流供应而发生的匹配性下降，是存活的心肌在低灌注下防止口身坏死的口我保护状态。HM己成为近年来冠心病研究领域中的热点之一，但其形成的确切机制尚不完全清楚。近年来发现TNF-a能够促进心脏重构口］，心脏重构指心肌细胞外间质数量和质量的变化及心肌细胞的凋广，此外丝裂素活化蛋口激酶家族(mitogenactivatedproteinkinases,MAPKs)可能参与了HM的形成。本研究观察冠

7、心病患者HM细胞的p38MAPK>TNF-amRNA的表达,并分析它们之间的关系，初步探索HM形成的分子生物学机制。1材料和方法1.1实验材料兔抗P-P38购自美国SANTACRUZ公司；碱性磷酸酶标记羊抗兔TgG.TNF-amRNA原位杂交试剂盒购自武汉博士德生物公司。1.2心肌标本来源10例心肌标本均来自2004年8月一2006年3月在扬州大学附属医院心胸外科行冠状动脉搭桥手术(CABG)的冠心病患者，冠状动脉造影至少有1支冠状动脉狭窄程度大于85%,男7例、女3例，平均年龄(58.3±4・2)岁，病史均超过18个

8、月。术中取HM及正常心肌(normalmyocardium,NM)O1.3HM定位1.3.1技术方法采用多巴酚丁胺超声负荷试验(DSE)结合组织多普勒成像(DTI)技术，将左心室按美国超声心动图协会方法分为相对应的16个节段。1.3.2DSE检查方案试验分为静息、多巴酚丁胺10ug/(kg-min)、30ug/(kg-min)3个