核转录因子-κB抑制剂对儿童急性淋巴细胞白血病细胞生长调控和凋亡的影响及意义.doc

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1、核转录因子-KB抑制剂对儿童急性淋巴细胞白血病细胞生长调控和凋亡的影响及意义作者：安琪，薛天阳，许伟，高吉照【摘要】目的探讨核转录因子-kB(NF-kB)抑制剂对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞生长和凋亡的影响及意义。方法分组：对照组、对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸甲基甲酮(TPCK)组、地塞米松(Dex)组、TPCK+Dex组。MTT比色分析法测定细胞生长抑制率，流式细胞术测定细胞凋亡率。结果TPCK和Dex均可引起AI丄细胞生长抑制和凋亡，其生长抑制率和凋亡率与对照组比较，差异均有统计学意义(P均V0.0

2、1)oTPCK+Dex组的生长抑制率和凋亡率显著高于两者单独使用时，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)o结论NF-kB可能通过抑制细胞凋亡和促进细胞增殖参与儿童ALL的发病。抑制NF-kB信号传导途径可能在儿童ALL治疗屮有重大价值。【关键词】急性淋巴细胞白血病；核转录因子-kB抑制剂；细胞增殖；细胞凋亡Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectandsignificanceofnuclearfactor-kBproteaseinhibitoroncellp

3、roliferationandapoptosisinchiIdhoodacute1ymphoblasticleukemia(ALL)・MethodsTheALLcellsweredividedintofourgroups:controlgroup,p-Tosy1-L-pheny1alaninechloromethylketone(TPCK)group,dexamethasone(Dex)group,cotreatment(TPCKandDex)group.MTTcolorimetricassaywasemp

4、loyedtodeterminethecellproliferationandflowcytometrywasutilizedtoinvestigatetheapoptosisofALLcells.ResultsBothTPCKandDexcouldinduceALLcellsapoptosisandtheirdifferencesingrowthinhibitionrateandapoptosisratebetweenthoseofcontrolgroupwereconsideredstatistical

5、lysignificant(P<0.01)・ConelusionNF-kBmaybeinvolvedinchildhoodALLprogressionbyprohibitingcellapoptosisandpromotingcellproliferation.TheinhibitionofNF-kBconductionpathwaymayhassignificantvalueinchildhoodALLtreatment.Keywords:acutelymphoblasticleukemia;nuc

6、learfactor-kBproteaseinhibitor;proliferation;apoptosis近年来，研究发现核转录因子-kB(NF-kB)在肿瘤的发生、发展屮起重要作用，它可调控细胞的增殖、分化、凋亡与恶性转化［1］。本实验采用MTT比色分析法和流式细胞术测定急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞的生长率和凋亡率，以探讨NF-kB抑制剂对儿童ALL细胞的生长和凋亡的影响及意义。1资料和方法1.1一般资料选择2003年1月一2005年1月的ALL住院患儿20例，其中男15例，女5例；年龄1岁6个月〜

7、13岁，中位年龄6岁。诊断标准均按照1999年“小儿急性淋巴细胞白血病诊疗建议”［2］。1.2方法1.2.1标本取患儿化疗前骨髓2ml,分离单个核细胞，制备106/ml细胞悬液，取50细胞悬液滴片，冷丙酮固定，用SP免疫组化法检测NF-kBp65蛋白表达率（按试剂盒说明书进行）。选取NF-kBp65蛋白表达阳性的细胞悬液。1.2.2分组对照组，细胞悬液作为对照组；对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸甲基甲酮组（TPCK组）,终浓度为40Uinol/L,培养2h；地塞米松组（Dex组），终浓度5.0ug/ml,培养24h

8、；TPCK联合Dex组（TPCK+Dex组），先以40Pmol/LTPCK培养2h,撤药，再加入5.0Pg/mlDex培养24ho每组设3个复孔。1.2.3MTT比色分析培养至既定的时间，各组细胞经1800r/min离心5min,弃上清，悬浮于200u1/孔的MTT（5mg/ml）中，继续孵育4ho离心弃上清，加二甲基亚矶（DMS0）,200M1/孔轻振荡，酶联免疫检测仪测定570nmD值。生长抑制率二1（对照组