荷斯坦奶牛cn和dumps遗传缺陷病的巢式pcr检测方法的建立和应用

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1、荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的巢式PCR检测方法的建立和应用代元元，吴晓薇，洪洁心，王怡飞，刘中勇，赵天楚，郭卉，郭霄峰(1．华南农业大学兽医学院，广东广州510642；2．广东出入境检验检疫局，广东广州510623；3苏州科技学院，江苏苏州215009)摘要：为建立荷斯坦奶牛瓜氨酸血症和尿苷酸核酶缺乏症两种遗传缺陷病的检测方法，根据文献报道的精氨酸琥珀酸合成酶、UMPS基因核苷酸序列，设计引物，通过条件的优化，建立了巢式PCR反应体系。结合PCR产物测序，建立了检测CN和DUMPS方法。取2

2、43份临床牛血清样品用巢式PCR检测并测序，发现CN野生型238份，CN杂合子型5份，CN突变型0份；DUMPS野生型236份，DUMPS杂合子型5份，DUMPS突变型2份。所建立的巢式PCR方法灵敏、特异，还兼具高通量的特点，适合口岸对荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的大样品量检测。关键词：荷斯坦奶牛；瓜氨酸血症；尿苷酸核酶缺乏症；巢式PCR中图分类号：$856．1；$823文献标识码：A文章编号：1005．944X(2014)01．0076．06DevelopmentandApplicatio

3、nofaNestedPCRAssayforDetectionofCNandDUMPSinHolsteinCattleDaiYuanyuan，WuXiaowei，HongJiexin2，WangY'fei，LiuZhongyong2，ZhaoTianchu，GuoHui，GuoXiaofeng(1．CollegeofVeterinaryMedicine，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China；2．GuangdongEntry-Exit

4、~pectionandQuarantineBureau，510623；3．SuzhouUniversityofScien~andTechnology，Suzhow，Jiangsu215009)Abstract：Theaimofthestudywastodevelopadiagnosticmethodfordetectingthetwogeneticdefects⋯CNandDUMPSinHolsteincattle．NestedPCRpfime~weredesignedbasedonASSgenean

5、dUMPSgeneandPCRconditionswereoptimized．243COWbloodsamplesweredetectedtoconfirmthepresenceofCNandDUMPSintheCOWSusingthedevelopedNestedPCRmethodandthePCRproductsweresequenced．Theresultsshowedthat238COWSwerewith．outCN，5suferedfromheterozygoteCN，and236COWSw

6、ithoutDUMPS，5heterozygoteDUMPSand2mutantDUMPSrespectively．TheseresultsindicatedthatthenewassaywassuitabletohandlelargequantityofCNandDUMPSdeficientdairyCOWSinportquarantineinspection．Keywords：Holsteincattle；CN：DUMPS；nestedPCR人工授精和胚胎移植技术在全球范围内得到推尿素循环发生代谢

7、紊乱的一种常染色体单基因隐广和应用，显著提高了奶牛的遗传性能，但奶牛优性遗传缺陷病，最早于1986年在澳大利亚的荷斯秀品质(胚胎、精液、种牛)的广泛流通应用使得坦牛群中发现。病牛出生时表现正常，但不一些隐性遗传疾病基因扩散，对全球各国奶业造成久后出现精神沉郁、步态紊乱、惊厥、失明等症巨大的经济损失。奶业发达国家已建立了完善的遗状，一般出生后5天死亡，死亡率达100％k3J。传缺陷检测和监控体系，使隐性有害基因频率逐年CN遗传学基础是由奶牛第11号染色体(BTAl1)降低uJ。因此，建立奶牛遗传缺陷病的

8、检测方法上编码精氨酸琥珀酸合成酶(argininosuccinate具有重要意义。synthase，ASS)的基因第5外显子发生C—T的瓜氨酸血症(citrullinemia，CN)是荷斯坦牛点突变，使密码子CGA转变为终止密码子TGA，圈勃物j1}废PCR反应体系其他条件保持不变，设置pfuDNAPolymerase酶(2．5U／u1)0．25pL、ddH，0DNA聚合酶分别为0．1，0．15，0．2，0．25，0．3，l8．75gL。扩增程序为：94