仪器分析实验报告.doc

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1、.仪器分析实验报告荧光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量院系：化学化工学院专业年级:2013级应用化学姓名:马芳学号:413072532015年11月12日..一、实验目的 1、学习荧光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的分析原理； 2、掌握荧光光度计的操作技术和测定多维葡萄糖粉中维生素B2的方法。二、实验原理 1、维生素B2，又叫核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶。维生素B2易溶于水二不易溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。 2、维生素B2水溶液在430~440nm蓝光或紫外光照射下回发生绿色荧光，荧光峰在535

2、nm，在pH=6~7的溶液中荧光强度最大，在pH=11的碱性溶液中荧光消失。 3、多维葡萄糖中含有维生素B1、B2、C、D2及葡萄糖，其中维生素C和葡萄糖在水溶液中不发荧光，维生素B1本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后才产生荧光，维生素D2用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素B2的测定。 维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。 4、荧光分析法：常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激发态

3、分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。 ..在稀溶液中荧光IF与物质的浓度c有以下的关系：                  IF=2.303φI0εbc(φ：量子产率，I0：入射光强度，ε：荧光分子的摩尔吸光系数，b：液槽厚度) 当实验条件一定时，荧光强度IF与荧光物质的浓度c成线性关系：IF=Kc5、荧光光谱： （1）激发光谱：固定测量波长(选最大发射波长)，化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线。激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大。 （2）发射光

4、谱：固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线。 6、荧光分析仪器 （1）常用的荧光分析仪器由激发光源、单色器、液槽、检测器和显示记录器五部分构成..三、实验仪器与试剂荧光光度计 5 mL移液管1只，2 mL移液管1只， 50 mL容量瓶10只，10.0μg·mL-1维生素B2标准溶液（置阴暗处保存），冰乙酸（AR），多维葡萄糖粉试样。四、实验步骤 1、打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器，预热； 2、在6个干净的50 mL容量瓶中，用吸量管分别吸取0.50，1.00，1.50，2.00，2

5、.50，3.00mL的10.0μg·mL-1维生素B2标准溶液，再分别加入2.00 mL冰乙酸，稀释至刻度，摇匀。得到不同浓度的溶液分别是：0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6μg·mL-1的维生素B2溶液； 3、仪器初始化完毕后，在比色皿中装入0.3μg·mL-1的维生素B2溶液，在工作界面上选择测量项目（并设置适当的仪器参数：如灵敏度＝2，入射缝宽和出射缝宽均为10nm等）： （1）固定发射波长为526nm，扫描激发波长（范围是400~480nm），记录所得数据（2）再固定激发波长为452nm，扫描发射波长（范围是500~550nm

6、），记录所得数据 4、标准系列溶液的配制及标准溶液荧光强度的测定：根据步骤3中所得数据，确定激发波长为452nm，发射波长为535..nm，将之前配置的0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6μg·mL-1的维生素B2溶液，从稀到浓测量系列标准溶液的荧光强度，每种各测量三次，记录所得数据5、未知试样的测定：用电子天平准确称取0.15~0.20 g多维葡萄糖粉试样，用少量水溶解后转入50 mL容量瓶中，加2.00 mL冰乙酸，稀释至刻度，摇匀。用测定标准系列时相同的条件，平行测量其荧光强度3次，记录所得数据； 五、数据处理1.由实验步骤3所得

7、最大发射波长为535nm，最大激发波长为452nm。2.用标准系列溶液的荧光强度绘制标准工作曲线浓度（µg/mL）123平均0.18685.7985.6785.820.2161.1161.5160.3161.00.3250.2250.4249.7250.10.4326.9326.5326.1326.50.5399.4399.1400.8399.80.6481.7483.2481.7482.2..由图可知，R2=0.9994，证明线性关系良好，可用于计算待测样浓度3、未知样品浓度的测定： 称取的多维葡萄糖粉质量m1=0.1755g，m2=0.17g

8、,m3=0.1767g试样荧光强度①荧光强度②荧光强度③荧光强度平均1153.1152.2151.5152.32152.8152.815