一种活性污泥总DNA提取方法的优化-论文.pdf

《一种活性污泥总DNA提取方法的优化-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、第6卷第3期环境工程学报Vo1．6．No．32012年3月ChineseJournalofEnvironmentalEngineeringMar．2012一种活性污泥总DNA提取方法的优化闫建芳刘秋张璐齐小辉张黎(1．大连民族学院生命科学学院，大连116600；2沈阳农业大学高等职业技术学院，沈阳110122)摘要对3种活性污泥DNA提取方法——传统蛋白酶K—SDS一氯仿异戊醇法(CPSCI法)、液氮研磨法和脱腐处理法进行了对比，并针对CPSCI法从污泥量、保温时间、裂解方式及沉淀时间等4个方面进行了优化。结果表明，优化的蛋白酶K一氯仿一异戊醇法(OPSCI法)采用污泥量0．10g

2、、37℃静置10min，加SDS常温旋涡振荡及异丙醇直接离心等条件可获得长度在23．1kb左右的DNA，OD。／OD。为1．86，稀释1O倍后即可进行16SrDNAPCR。该方法重复性好，提取得率高，纯度好，操作简便，为常规实验室开展活性污泥微生物多样性研究提供了帮助。关键词活性污泥DNA提取16SrDNAPCROPSCI中图分类号X705文献标识码A文章编号1673—9108(2012)03—1000~5OptimizationOfDNAextractionfromactivesludgeYanJianfangLiuQiu。ZhangLuQiXiaohuiZhangLi(1．Li

3、feScienceCollege，DalianNationalitiesUniversity，Dalian116600，China；2．VocationalCollegeofShenyangAgriculturalUniversity，Shenyang110122，China)AbstractThreeDNAextractionmethodsfromactivesludge．classicalproteinaseK—SDS—chloroform／isoamylalcoholmethod(CPSCImethod)，liquidnitrogenskivingmethodandhumic

4、acidsremovingmethodwerecompared．CPSCImethodwasoptimizedonthequantityofsludge，incubationtime，centrifugationtimeandpre—cipitationtimeinisopropanol，respectively．Theresultsshowedthat23．1kbgenicDNA(OD260／OD280=1．86)canbeobtainedbyoptimizedCPSCImethod(OPSCI)undertheconditionsofusingabout0．10gsludge，

5、incubating10rainat37℃．shaking5minwithSDSatroomtemperatureandcentrifugatingdirectlyafteraddingisopropano1．TheacquiredDNAdilution(10times)canbeusedforPCR．TheOPSCImethodintroducedinthispaperpossessedgoodrepeatability，simpleoperation，andhighqualityandyield．Itwasarapidandadvancedmethodforextracting

6、DNAfromactivesludgesamplesingenerallaboratory．Keywordsactivesludge；DNAextraction；16SrDNAPCR；OPSCI污水生物处理技术是利用活性污泥微生物代谢DNA的方法有很多。。，但由于普遍存在操作费时过程中产生的酶分解有机污染物，从而达到净化污费力、仪器试剂要求高、腐殖酸等杂质含量大等问水的目的。活性污泥生物活性的高低主要取决于其题，给后续研究结果造成严重影响，因此，从已报道中的微生物菌群结构和功能，这决定了一个污水处的DNA提取方法中筛选能够快速、高效、低成本、高理厂的污水处理能力。因此，对活性污泥中

7、微生质量提供基因组DNA的方法对研究污泥中微生物物多样性和动态性进行研究与监测以改良活性污泥分布及种群分析具有重要意义。本实验比较了液微生物组成是提高污水处理效率的重要手段。近年氮研磨法、脱腐处理法¨和传统蛋白酶K一氯仿一异来，以16SrRNA为主要对象的PCR技术、电泳技戊醇法(CPSCI法)提取活性污泥总DNA的效术、克隆文库技术、荧光原位杂交和流式细胞术等免果，并从污泥量、保温时间和沉淀时间等方面进行培养的分子生物学技术不断应用到活性污泥菌群的基金项目：国家自然