天花粉蛋白通过抑制核因子KB促进顺铂诱导喉癌细胞凋亡的研究-论文.pdf

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1、．322．中华耳鼻咽喉头颈外科杂志2013年4月第48卷第4期ChinJOtorhinolaryngolHeadNeckSurg,P2U01．．．论著．天花粉蛋白通过抑制核因子KB促进顺铂诱导喉癌细胞凋亡的研究张铎路丽明陈斌李青周健陶磊【摘要】目的研究低剂量顺铂和低浓度天花粉蛋白(trichosanthin，TCS)联合作用抑制喉癌细胞(Hep．2细胞株和AMC．HN．8细胞株)增殖的作用及其机制。方法设立不同的实验组，包括低浓度顺铂组(3m1)、高浓度顺铂组(10g／m1)、TCS组(5m1)、TCS和顺铂联合作用组(5mlTC

2、S和3g／ml顺铂)和阴性对照组；连续5d使用细胞增殖检测法(cellcountingkit一8，CCK一8)和乳酸脱氢酶法检测不同实验组对喉癌细胞的抑制作用和细胞毒性；流式细胞仪和Hochest33258染色观察细胞凋亡；Westernblot检测C—Jun氨基端激酶(JNK)，磷酸化JNK、核因子KB(nuclearfactorKB，NF—KB)、p38、磷酸化p38、KB抑制蛋白(inhibitorofKB，I-KB)及磷酸化I—KB的变化。结果与TCS和低剂量顺铂单独作用相比，TCS和顺铂联合作用可明显抑制喉癌细胞的生长(

3、P值均<0．o1)，凋亡细胞数量增加；联合作用组的抑制效果与高浓度顺铂组差异无统计学意义，细胞毒性同TCS和顺铂单独作用相比差异无统计学意义(P>0．05)，而毒性低于高浓度顺铂组(P<0．01)；Westernblot显示顺铂增强NF．KB转录因子活性，抑制JNK信号通路，TCS组主要激活JNK信号通路而抑制NF—KB，TCS和顺铂联合作用后磷酸化JNK保持高水平抑制NF—KB活性。结论TCS通过激活JNK信号通路，同时抑制NF—KB转录因子活性，增强顺铂诱导喉癌细胞凋亡比例，从而降低其对细胞的毒性并增强其抗肿瘤疗效，为中药天花

4、粉蛋白联合顺铂应用于喉癌临床治疗奠定了实验基础。【关键词】天花粉素；顺铂；JNK丝裂原活化蛋白激酶；NF—KB；喉肿瘤；细胞凋亡Thrichosanthinenhancescisplatin-inducedlaryngocarcinomaapoptosisthroughinhibitingtranscriptionfactornuclearfactorKBZHANGDuo，LULi—ming，CHENBin，LIQing，ZHOUJian，TAOLei．DepartmentofOtorhinolatyngologyHeadandN

5、eckSurgery，EyeEarNoseandThroatHospitalofFudanUniversity，Shanghai200031，ChinaCorrespondingauthor：TAOLei，Entail：doctortaolei@163．corn【Abstract】0bjectiveToinvestigatethecombinedeffectofthrichosanthin(TCS)andcisplatinonHep一2andAMC—HN一8cellproliferation．MethodsHep-2andAMC—

6、HN一8cellsweretreatedwithlow(3g／m1)orhigh(10g／m1)concentrationofcisplatin(10g／m1)，TCS(5m1)，orthecombinationTCS(5m1)andcisplatin(3g／m1)，thecellsnoexposuretothedrugsascontro1．CellproliferationwasdetectedbyCCK一8．ToxicityofdrugstocellswasevaluatedbyLDHassay．Flowcytometrywa

7、susedtodetectapoptosis．WesternblotwasperformedtodetecttheexpressionsofJNK，phosphor-JNK，p38，phosphor．p38，NF—KB，inhibitorofKB(I—KB)，andphospho．I—KB．ResultsComparedwithTCS(5m1)orcisplatin(3m1)alone，thecombinationofthemhadmoresignificantinhibitoryeffectontheproliferationo

8、fHep-2andAMC—HN一8cells(P<0．01)，butwithnosignificantincreaseincytotoxicity(P>0．05)．WesternblotshowedtheexpressionofplJNK／SAPK