LY294002联合顺铂阻断P13K-Akt通路诱导喉癌Hep-2细胞凋亡研究-论文.pdf

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1、·132·JournMofPracticalOncologyVo1．28No．22013LY294002联合顺铂阻断PI3K·Akt通路诱导喉癌Hep-2细胞凋亡研究宋岩，刘秀萍，白伟良，季文樾(中国医科大学附属盛京医院耳鼻喉科，辽宁沈阳110004)摘要：目的研究PI3K／Akt特异性抑制剂LY294002联合顺铂对体外培养的人喉癌Hep-2细胞的抑制作用。方法MTI"法检测顺铂单独或联合LY294002对人喉癌Hep一2细胞的抑制率。流式细胞技术及Western印迹法检测顺铂单独或联合LY294002作用对人喉癌Hep-2细胞凋

2、亡的影响。结果LY294002联合顺铂与单独应用顺铂抑制率为(86．47±18．19)％与(45．32±12．21)％，凋亡率为(65．21±14．19)％与(25．36±4．23)％，差异均有统计学意义(P<0．01)。联合LY294002能显著提高顺铂对Hep一2细胞的抑制率和Hep·2细胞的凋亡水平。结论LY294002通过促进细胞凋亡有效提高Hep-2细胞对顺铂的抑制作用的敏感性。通过抑制PI3K／Akt信号转导通路的激活，其可明显提高顺铂对喉癌的治疗效果。关键词：喉肿瘤／药物疗法；蛋白激酶类／遗传学；磷脂酰肌醇类／遗传学；

3、信号传导／药物作用；细胞凋亡；顺铂／药理学；肿瘤细胞，培养的／药物作用中图分类号：R739．65；R730．53文献标志码：A文章编号：1001-1692(2013)02-0132-03喉癌是喉部最常见的恶性肿瘤，其发病率逐年由Gibco生产。P．Akt和Akt抗体购于上海生工生提高。喉癌的确切病因尚不清楚，可能有多种因素物有限公司。标准胎牛血清、胰蛋白酶、青链霉素、综合作用。尽管近年来手术、化疗和放疗技术有明磷酸盐缓冲溶液(phosphatebufferedsaline，PBS)购显提高，晚期复发型喉癌的治疗仍不容乐观。相较自上海

4、生工生物有限公司。FACSCalibur型流式细于传统的手术及手术联合放疗的方式，化疗及化疗胞仪购自美国BectoDickinson公司，CO恒温培养联合放疗对于晚期复发型喉癌患者总生存率、器官箱、离心机购自日本SANYO公司，SW．CJ．1B型净化保留都有提高。近年发现PI3K／Akt抑制剂工作台购自苏州净化设备厂。LY294002可明显增强某些抗肿瘤药物的疗效，减少1．2方法化疗抵抗作用¨J，但对喉癌的研究甚少。本实验研1．2．1细胞培养含10％胎牛血清和1％双抗的究顺铂单独或联合LY294002应用对人喉癌Hep-2RPMI一

5、1640培养液于37℃、5．0％CO，饱和湿度的细胞的增殖和凋亡的影响及其机制。条件下培养喉鳞状细胞癌Hep．2细胞，生长至对数期用于下述实验。1材料和方法1．2．2MTT法测细胞抑制率取对数生长期1．1实验材料Hep一2细胞，胰酶消化制成单细胞悬液，细胞浓度调喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株购自中国科学院上整至1x10／L，以每孑L200IxL接种于96孔塑料培海细胞生物学研究所。LY294002购自施贵宝。核养板内，待细胞贴壁生长后，分为4组，分别给予培糖核酸酶(ribonuclease，RNase)、MTF、碘化丙啶养液、25tx

6、mol／LLY294002、1g／L顺铂、1g／L顺铂(proidumiodide，PI)、二甲基亚枫(dimethyl联合25txmol／LLY294002，并设定调零孔和对照sulfoxide，DMSO)等均购自Sigma公司。AnnexinV孔，作用24小时后，加人MTF，继续培养4小时，吸凋亡检测试剂盒购自凯基公司。TMPI．1640培养液除孔内液体，每孔加入DMSO150txL，震荡l0分钟，酶标仪检测490nm波长处各孔吸收度A值，并绘收稿日期：2012-06—10制生长曲线，观察细胞受抑制情况。细胞抑制率=基金项目：辽

7、宁省自然科学基金(20082105)作者简介：宋岩(1982．)，女，辽宁沈阳人，中国医科大(1一加药孔细胞A值／对照孔细胞A值)x100％。学附属盛京医院讲师，博士，从事喉癌凋亡相关研究．1．2．3流式细胞仪分析细胞凋亡率细胞培养后通信作者E—mail：jiwy@sj—hospita1．org分为3组，分别加入终浓度为25Ixmol／LLY294002·134·抗凋亡途径之称，与肿瘤进展和放化疗抵抗有密切达水平无明显影响，说明非磷酸Akt不具有生物学关系_3J。LY294002是PI3K的特异性抑制剂，通过活性，故推测LY2940

8、02的抗增殖活性可能与PI3K／阻断蛋白激酶磷酸化可增加细胞凋亡率，与常规放Akt信号转导途径活化有关。顺铂联合LY294002化疗联合应用，具有协同和增敏作用，并可减少毒性后较Nef单独作用后caspase．3表达上调，说明联合作用