基于DPO引物的空肠弯曲菌PCR检测方法的建立与初步应用-论文.pdf

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1、第36卷第4期中国预防兽医学报Vo1．36．NO．42014年4月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineApr．2014doi：10．3969~．issn．1008—0589．2014．04．10基于DPO引物的空肠弯曲茵PCR检测方法的建立与初步应用徐义刚，李丹丹，刘忠梅，吴岩，魏冬旭，李苏龙(1．黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心，黑龙江哈尔滨150001；2．海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心，海南海口570125)摘要：为建立特异、快速检测空肠弯曲菌的方法，本研究针对其gyrA基因设计了一对双启动寡核苷酸引物(DPO

2、)，建立了空肠弯曲茵DPO．PCR检测方法。试验结果显示，该方法的检测下限为1．2×10cfu／mL，在48℃～68℃退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段，表明该方法退火温度范围宽，同时DPO引物特异性强，PCR反应过程中不会产生非特异性扩增。利用该方法对采集的184份样品进行检测，共计检出17份空肠弯曲菌阳性样品，经国标法(GB／T4789．9—2008)复验，两者检测结果一致，显示了良好的实用性。该DPOPCR方法设计简单、特异性强，为致病微生物的快速准确检测提供了新方法。关键词：空肠弯曲菌；gyrA基因；DPO．PCR中图分类号：$852．61文献标识码：A文章编号：100

3、8．0589(2014)04．0293．04DevelopmentandpreliminaryapplicationofDPO—basedPCRmethodfordetectionofCampylobacterjejuniXUYi—gang，LIDan-dan，LIUZhong—mei，WUYan，WEIDong—XU，LISu—longf1．TechnicalCentreofHeilongjiangEntry-exitInspectionandQuarantineBureau，Harbin150001，China；2．TechnicalCen~eofHainanEntry-ex

4、itInspectionandQuarantineBureau，Haikou570125，China)Abstract：Inthisexperiment，aDual-primingoligonucleotide(DPO)一basedPCRmethodfordetectionofCampylobacterjejuniwasdevelopedusinggyrAgeneofCjejuniastargetgene．TheDPO-PCRmethodhadadetectionlimitof1．2x102cfuforC．jejani，whichwasabletoeficientlyamplif

5、ytargetgeneintheannealingtemperaturerangefrom48。Cto68℃，showinginsensitivitytoannealingtemperature．Furthermore，theDPO-PCRmethodhadhighspecificityduetospecialstructureofDPOprimers，thusnonon—specificamplificationswereproducedinreaction．Inaddition，atotal17positivesamplesforCdejuniweredetectedfrom

6、184clinicalsamplesbytheDPO—PCRmethod，whichwasinaccordancewiththetestingresultbyGB／T4789．4—2008standarddetectionprotoco1．Therefore，theDPO—PCRmethodprovidesanovelrapidandsensitivedetectionmethodforC．jejuniinfection．Keywords：Campylobacterjejuni；gyrAgene；DPO—PCR*Correspondingauthor收稿日期：2013—09—15

7、基金项目：国家质检总局科技计划项目(2012IK157、2013IK051)；质检公益性行业科研专项(201310126)作者简介：徐义刚(1978．)，男，吉林汪清人，高级兽医师，主要从事致病微生物诊断与防治技术研究．通信作者：E．mail：ciqlsl@aliyun．corn294中国预防兽医学报2014正空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni)是一种重要的物技术公司；184份临床检测样品采自畜禽饲养场人畜共患病致病菌，也是一种危害严重的食源性致和市场流通食品，包