应用农杆菌介导的生长点转化方法建立甜瓜遗传转化技术-论文.pdf

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1、华北农学报·2014，29(2)：116—120应用农杆菌介导的生长点转化方法建立甜瓜遗传转化技术、郝金凤，荆培培，张丽，哈斯阿古拉(内蒙古大学生命科学学院，内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术重点实验室，内蒙古呼和浩特010021)摘要：为探讨甜瓜的遗传转化技术，以甜瓜品种河套蜜瓜腋芽生长点做外植体，利用庆大霉素基因作为筛选基因，对影响农杆菌转化的菌液浓度、转化时间、共培养时间进行了正交试验。通过优化转化条件，建立了农杆菌介导的甜瓜腋芽生长点遗传转化体系。结果表明，采用培养20d的无菌苗，以腋芽作为外植体，预培养1d；用0D=0．7的菌液转化10min后，黑暗中共培养2d，然后用40mg／

2、L庆大霉素进行筛选；移栽后在叶片上喷洒20mg／L庆大霉素筛选转基因植株，效果最好。通过对庆大霉素抗性苗进行PCR检测，初步验证外源基因已经整合进甜瓜基因组，转化率达到76％，幼苗移栽成活率为76．3％。关键词：甜瓜；植物生长点；遗传转化；农杆菌中图分类号：s652文献标识码：A文章编号：1000—7091(2014)02一O116—05EstablishmentofTransformationMethodforMelonUsingAgrobacterium-mediatedPlantGeneticTransformationViaPlantApicalMeristemHA0Jin—fen

3、g，JINGPei—pei，ZHANGLi，HASIAgula(1．CollegeofLifeSciencesofInnerMongoliaUniversity，InnerMongoliaKeyLaboratoryHerbageandEndemicCropBiotechology，Huhhot010021，China)Abstract：Ahigh—frequencytransformationsystemhasbeenestablishedbyAgrobacteriumtumefacienstransfor-mationtechnologyandusingmeristemsofaxilla

4、rybudsastransformationreceptor．Externalfactorsthataffecttheef-ficiencyofgenetictransformationonthebaseofgentamicinwerestudiedandoptimized，suchasthebacterialcon—centrationandthetimesoftransformationandco—cultivation．Themajorresultswereasfollows：seedlingwasgrownf0r20days．thenaxillarybudsexcisedandst

5、abbedwereinfectedwithAgrobacteriumtumefacienswhichODr00was0．7for10min．ThenafterCO-cultivationfor2days，transformedplantswereselectedby20mg／Land40mg／Lgen—tamicinOiltheleavesandrootingrespectively．ItwasoriginallyprovedbythePCRthatexpressioncassetteshadbeentransferredintothegenome．Thepositivetransform

6、ationratewas76％bytheanalysisofPCR．Andthelivingrateofthetransplantedtransgenicplantswas76．3％．Keywords：Melon；Plantapicalmeristem；Genetictransformation；Agrobacteriumtumefaciens20世纪90年代初，转基因技术逐步应用于甜转化了甜瓜品种河套蜜瓜。但这些甜瓜的转化方法瓜。1990年，Fang等利用根癌农杆菌侵染甜瓜子都有其不足之处，花粉管通道法受时间和环境条件的叶，成功地将NPT1I基因转入了甜瓜(Cucumismelo限制，农

7、杆菌介导法转化甜瓜子叶外植体获得的转基L．)。随后利用农杆菌介导法转化甜瓜的研究越来越因植株移栽成活率低，而且组培过程中需要脱分化和多2J，内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术重点再分化的繁琐步骤。1988年，McCab等用基因枪实验室分别用农杆菌介导法和花粉管通道法J法首次转化大豆茎尖分生组织获得了成功，这为利用收稿日期：2013—10—11基金项目：国家自然科学基金资助项目(31101559；31360486)；教育部