一种短小芽孢杆菌分离鉴定及培养条件研究-论文.pdf

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1、浙江理工大学学报(自然科学版)，第31卷，第4期，2014年7月JournalofZhejiangSci-TechUniversity(NaturalSciences)Vo1．31，No．4，Ju1．2014文章编号：1673—3851(2014)04-0467—07一种短小芽孢杆菌分离鉴定及培养条件研究孔高飞，金敏，朱莲莲。林高强，刘小川(浙江理工大学生物工程研究所，杭州310018)摘要：为实施城市垃圾渗透液的生物无害化处理，分离、筛选、鉴定，获得特定菌株，并对其最适培养条件和最佳培养基组分进行优化。从城市垃圾填埋场垃圾渗透液中分离芽孢杆

2、茵，通过设计特异性引物进行PCR反应鉴定目的菌株。此茵细胞呈现杆状，革兰氏阳性，经鉴定为短小芽孢杆菌。采用单因素实验和正交实验法对茵株生长适宜的培养基进行了优化。优化后的培养基主要成分为：玉米淀粉0．1，酵母提取物1．O，小牛浸膏0．3，NaC10．5，MgS04·7H2O0．49％。在这种条件下，菌株培养10h，其OD32。由l_44上升到6．93，为该菌株的深入研究和应用奠定了基础。关键词：垃圾渗透液；短小芽孢杆菌；鉴定；培养条件优化中图分类号：Q938．1文献标志码：A杆菌能够分泌活性很强的纤维素酶、脂肪酶_4J、木聚O引言糖酶l5和果

3、胶裂解酶_6]等，有利于降解大分子物质。随着社会的高速发展，越来越多的废弃物被排还可以产生抗菌素及抗菌蛋白等拮抗性物质[7]，抑放到环境中，有些化合物含有剧毒，有致癌的作用，菌范围广l_8]，对多种病原菌都有抑制作用_9]。产生且很难自然降解。这些有害的物质随着垃圾渗透的聚一7一谷氨酸可用于降解塑料口。。。黄庆l1u从成都液，对周围地下水和土壤造成了严重的污染。治理市垃圾中分离得到一株短小芽孢杆菌能够产生脱毛环境污染已经成为世界各国努力攻克的难题。科学蛋白酶，利用该蛋白酶采用酶法脱毛技术应用在皮家们采用化学、物理方法结合生物方法来处理污染革工

4、业中，对解决皮革的环境污染问题有着重要的物，其中微生物方法治理环境有明显的优势。但是意义。Fakhfakh等[1]也报道了短小芽孢杆菌A1由于人们日常生活中基本上不对垃圾进行分类，导菌株能降解羊毛废弃物。短小芽孢杆菌发酵所产生致了生活垃圾渗透液中金属离子含量很高，一些降的蛋白酶组成洗涤剂去污效果好l_】，提高了洗涤剂解垃圾的菌株抗性差，处理垃圾效果不明显。因此的利用率。Panbangred等[1报道短小芽孢杆菌产亟待开发出一种高表达的、抗性强的，且能够降解垃生的木聚糖酶具有良好的耐碱性，能够进行生物漂圾渗透液的优良菌株。已经有研究报道短小芽孢

5、杆白，可以降低有机氯化物，减少环境污染。Geetha菌(Bacilluspumilus)对降解垃圾有很好的效果_1]，等l1]通过优化含有农业废弃物的培养基，提高了短且短小芽孢杆菌由于繁殖速度快，能产生稳定的芽小芽孢杆菌在农业废弃物中产木聚糖酶的水平，降孢，抗逆能力强，成为了越来越受瞩目的生防材料低了生产木聚糖酶的成本，又利用了废弃物，减少污之一。染。游春平等口。分离得到的短小芽孢杆菌对稻瘟短小芽孢杆菌为芽孢杆菌属的一种，显微镜下病菌有一定的抑制作用。AkhtarE"]在治疗鹰嘴豆观察营养细胞为杆状，革兰氏反应阳性[2]，能运动。根腐病时，采

6、用短小芽孢杆菌制剂获得了很好的防菌落形态有半透明状和不透明状两种[3]。短小芽孢治效果。张蕾l_1]筛选到一株短小芽孢杆菌TY079，收稿日期：2O13—11～l1作者简介：孔高飞(1988一)，女，山西晋城人，硕士研究生，研究方向为微生物环境生态学。通信作者：刘小川，E-mail：xcliu@zstu．edu．cn468浙江理工大学学报(自然科学版)2014年第31卷对黄瓜枯萎病、棉花黄萎病具有显著的抑制作用。的条带的大小来判断所得到的条带是否为目的条由此可以看出短小芽孢杆菌在环境治理、工业、带。将分离得到的菌株接种于NA培养基，37℃，农

7、业等领域都有广阔的应用前景。本文致力于从城220r／min培养10h。采用改进的CTAB法提取菌市生活垃圾填埋场渗透液中分离得到一株短小芽孢株的总基因组。通过对短小芽孢杆菌16SrRNA碱杆菌，研究其最适培养基和最佳培养条件，使培养基基序列及gyrA、rpoA基因序列的分析，设计出6对的各组分之间保持平衡，得到菌株的最适生长环境，特异性引物(表1)，通过对菌株的总基因组进行特可以降低培养成本提高产率，为该菌株的工业和城异性PCR扩增反应，分析其电泳结果图，进一步从市垃圾渗透液处理应用奠定基础。分子水平来鉴定分离得到的菌株是否为短小芽孢杆菌。P

8、CR扩增程序为：94℃预变性3min；94℃1材料与方法40S，61．7℃40S，72℃45S，循环33次；72℃延伸1．1实验材料10min。1．1．1菌种表1特