一例鸡多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验-论文.pdf

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1、·42·《上海畜牧兽医通讯》2014年第4期一例鸡多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验赵飞飞孟薇薇吴海珍牛卫卫李士成(山东华宏生物工程有限公司山东滨州256600)【摘要】从某养殖场的病死鸡中分离获得1株巴氏杆菌，血清型鉴定为A型。攻毒试验中，试验鸡表现出巴氏杆菌病的典型临床症状；采集病死试验鸡的心脏、肝脏病料，以同样方法分离到巴氏杆菌。以柯氏法则及药敏试验结果诊断该鸡场发生巴氏杆菌病且菌株的致病力较强。本研究为该病的实验室诊断及防控提供了方法。关键词：巴氏杆病；分离；鉴定；药敏试验禽巴氏杆菌病又名禽霍乱、禽出

2、血性败血症，司，氯化钠购自烟台市双双化工有限公司，药敏片是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida)引起购自北京陆桥技术有限责任公司。的鸡、火鸡、鸭、鹅等多种禽类的传染病。本病常呈1．1．3试验动物：4月龄SPF鸡，购自山东省实验现败血症过程，发病率和死亡率很高，也见慢性经动物中心。过。一年四季均可发生，但以冷热交替、气候剧变、1．2方法闷热、潮湿、多雨时期发生较多。可经消化道、呼吸1．2．1病料镜检：剖检病死鸡，取肝脏、肺脏制作道感染，也可经破损的皮肤黏膜感染，带菌禽是主病料涂片，革兰氏染

3、色后镜检。要传染源。一般为散发，有时可呈地方性流行，呈1．2．2细菌分离培养。：无菌条件下取送检病料的世界性分布，是严重危害养禽业的重要细菌性传染肝脏，划线接种于鲜血马丁琼脂培养基、麦康凯琼病之一。。脂平板，37℃培养24h，观察分离菌在鲜血马丁琼2014年2月某养殖场饲养的10000羽肉鸡出脂培养基、麦康凯琼脂平板的生长情况。现食欲不振，体温升高，呼吸困难，鼻孔、口腔流黏1．2．3细菌形态观察：挑取鲜血马丁琼脂培养基液，伴有腹泻的现象。发病初期死亡10～20羽／d，上的单个菌落，制作细菌涂片，并进行革兰氏染

4、色、之后死亡数上升至100羽／d左右，给养殖场造成了镜检。巨大的损失。笔者对该起病例进行实验室诊断，由1．2．4生化试验：取纯化的菌落接种微量鉴定死亡鸡体内分离获得1株巴氏杆菌，利用分离纯化管中，置37℃温箱培养48h，观察试验结果。菌进行攻毒试验和药敏试验，现将试验结果汇报1．2．5血清型的鉴定：取标准阳性血清，采用玻片如下。凝集的方法测定分离菌株的血清型。1材料和方法1．2．6动物攻毒试验：将鲜血马丁琼脂培养基上1．1材料培养24h的菌落，用灭菌生理盐水洗下来，按5％的1．1．1病料来源：病死鸡，由山东潍

5、坊某养殖场比例加入到200mL含5血清的马丁肉汤中，培养送检。18h。平板计数法测定菌液的浓度为1．5×1．1．2主要试剂：麦康凯琼脂购自北京奥博星生lOCFU／mL。实验组：a组原菌液(1．5×物技术有限责任公司，改良马丁琼脂培养基、改良1O。CFU／mL)1．0mE／羽，胸肌注射3羽；b组原液马丁培养基均购自青岛市高科园海博生物技术有进行2×10倍稀释(75个菌／mL)1．0mE／羽，胸肌限公司，革兰氏染液购自北京陆桥技术有限责任公注射3羽；c组原液进行2×1O倍稀释(7．5个菌／mE)1mE／羽，胸肌注

6、射3羽。对照组：取含5血清的*为通讯作者马丁肉汤1．0mE／羽，胸肌注射3羽。观察并记录《上海畜牧兽医通讯》2014年第4期·43·攻毒鸡的临床症状，剖检病死鸡，观察病理变化，并头孢哌酮(舒巴坦)、头孢唑啉钠、恩诺沙星、头孢噻取其肝脏做细菌分离培养。吩、环丙沙星、头孢氨苄高度敏感药物(抑菌圈>1．2．7药敏试验“：将分离菌的纯培养物用灭菌生15mm)，对阿米卡星、呋喃妥因、氟罗沙星、诺氟沙理盐水稀释后涂布于鲜血马丁琼脂培养基上，采用星、妥布霉素、新霉素、利福平中度敏感(10≤抑菌Kirby—Bauer纸片扩散

7、法对28种抗生素进行药敏试圈≤15mm)，对氧氟沙星、甲氧嘧啶、卡那霉素、林验。判定标准为抑菌圈直径>15mm为高敏，10≤可霉素、头孢哌酮、红霉素、氨苄西林、青霉素、头孢抑菌圈≤15mm为中敏，6<抑菌圈<10mm为呋辛、阿莫西林、庆大霉素不敏感。该菌株对11种低敏。药物出现耐药性。2结果3讨论2．1病料镜检结果3．1根据养殖场鸡群的临床症状、死亡趋势、病死剖检可见心冠脂肪出血，肝脏表面出现白色坏鸡的病理剖检变化、细菌的分离镜检以及生化试死灶，肠道鼓气并伴有出血，肺脏出血严重，肾脏肿验，可确定该鸡场鸡群感染

8、多杀性巴氏杆菌且血清大。病料涂片经革兰氏染色后镜检，可见两级浓染型为A型。的红色短杆菌。3．2据攻毒试验中试验鸡的死亡及剖检变化，可2．2细菌分离培养结果以看出该株巴氏杆菌具有较强的致病力。可选择麦康凯琼脂上未长菌；鲜血马丁琼脂培养基上药敏试验中头孢哌酮(舒巴坦)、头孢曲松、头孢噻呈灰白色、光滑、隆起、边缘整齐的中等大小菌落。肟等高度敏感的药物进行治疗。2．3细菌形态观察结果3．3禽巴氏杆菌病是严重