核苷类化合物含量测定方法的研究进展

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1、天津药学TianjinPharmacy2013年第25卷第6期53核苷类化合物含量测定方法的研究进展李静，朱静毅(扬州市药品检验所，扬州225009)摘要本文综述了近年来核苷类化合物含量测定方法的研究进展，包括HPLC法、毛细管电泳法、薄层色谱扫描法和紫外可见分光光度法，以期对相关研究提供参考。关键词核苷，含量测定，HPLC，毛细管电泳，薄层色谱扫描，紫外分光光度中图分类号：R927．2文献标识码：A文章编号：1006-5687(2013)06-0053-03核苷类化合物包括腺嘌呤、腺苷、3一脱氧腺苷(虫动相洗脱，检测波长254rim，测定了三角帆蚌中尿嘧草素)、尿嘧

2、啶、尿苷、鸟嘌呤、鸟苷、次黄嘌呤、胸嘧啶、啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷和胸腺嘧啶的含量，且方法胞苷等等。研究发现¨’2核苷类化学成分对人体免疫、简便又经济环保。王梦月等应用WatersC反相色代谢以及肝脏、心血管及神经系统等发挥着重要的生谱柱，检测波长260nm，流动相0．05mol／LKH2P04一理作用，且具有抗菌和抗病毒等生理活性，尤以腺苷的乙腈(97：3)，同时测定了海龙中胸腺嘧啶、次黄嘌呤、药理作用最为明显J，如腺苷具有改善心脑血液循环、尿嘧啶3种核苷类成分。为取得较理想分离效果，本防止心律失常、抑制神经递质释放和调节腺苷酸环化实验比较了不同比例的甲醇一水和乙

3、腈一水的分离效酶活性等。果，发现乙腈一水(3：97)效果较好，但总体分离效果核苷类化合物广泛存在于冬虫夏草、板蓝根、灵芝仍不理想，为此考查了向流动相中加入醋酸、三氟乙等中药材中，因其通常是中药活性成分，故核苷类化学酸、四氢呋喃、磷酸二氢钾后的分离效果，发现加入磷成分的含量可以作为中药材的质量控制指标。例如腺酸二氢钾较理想。因此，最终确定流动相0．05mol／L苷已被用作冬虫夏草的质控指标，《中国药典》2010KH，PO一乙腈(97：3)。年版把腺苷定为发酵虫草菌粉的含量测定项目，规定周惠燕等研究发现，核苷类化合物的含量测定虫草含腺苷不得少于0．010％。为此本文对核苷

4、类化主要使用两种流动相系统：一种为含磷酸盐缓冲液的合物的含量测定方法做一综述，为今后核苷类化合物流动相，一种为不含磷酸盐缓冲液的流动相。其中，核的研究提供参考。苷类化合物在含磷酸盐缓冲液的流动相中分离时间较1HPLC法短，保留时间基本在10min左右，但在测定多个核苷高效液相色谱(HPLC)是以液体作为流动相，并采类化合物时，和杂质分离度不够高；而在不含磷酸盐缓用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。该方法冲液的流动相中分离时间较长，保留时间较长，为25—因其高效、高灵敏度、分析速度快的特点被广泛应用于40min，峰形易扩散，但是分离度很好，且因为不含盐，医药、化学、

5、农学等研究领域。根据检测器的不同，可减少了对色谱柱的损伤。分为HPLC—UV法、HPLC—DAD法和HPLC—MS法。1．1．2梯度洗脱在液相色谱中，对组分复杂的样1．1HPLC—uV法在已经报道的HPLC法测定核品，当采用等度洗脱时，常常出现各峰分离度较差，或苷类化合物含量的文献中，最常见的就是使用普通紫峰完全分离时间过长的问题；而使用梯度洗脱时既可外检测器检测。根据流动相的洗脱方法不同可分为等缩短分离时间，提高分离能力，又能改善峰型，增加灵度洗脱和梯度洗脱。敏度，是一种较好的流动相系统。1．1．1等度洗脱应用等度洗脱法进行HPLC测定张元杰等采用ZorbaxSB—

6、Aq分析柱；流动相核苷类化合物含量的文献报道较多。为0．05％甲酸水溶液(A)一乙腈(B)，梯度洗脱(0—王棘等采用十八烷基键合硅胶色谱柱，以磷酸12min，0％B；12—17min，0％B2％B；17—27min，盐缓冲液(pH7．8—8．0)一乙腈(83：17)为流动相，2％B；27—45min，2％B20％B)，流速0．5ml／min；检测波长260nm，测定了尿苷、腺苷、次黄嘌呤核苷的检测波长260nm。在此条件下，成功分析了尿苷、鸟含量。姚静倩等采用Lichrosper—c18柱，以水为流苷、腺苷、腺嘌呤4个核甘类化学成分在6种常用补益收稿日期：2013-0

7、9—17天津药学TianjinPharmacy2013年第25卷第6期中药人参、黄芪、熟地黄、当归、麦冬和肉苁蓉中的含ESI—MS法，选择性离子检测，建立了冬虫夏草及其代量。张建芝等_9采用甲醇一5mmol／L乙酸铵一乙酸用品中虫草素的测定方法。经考查，该方法简便易行，缓冲盐(pH=4．30)作为流动相，以1ml／min的流速结果准确，重现性好，可适用于测定冬虫夏草及其代用进行梯度洗脱(洗脱梯度程序为：0～10min，0％一l％品中虫草素的含量和质量评价。A；10～20min，1％—％A；20—25min，5％A；25—352毛细管电泳法min，5％