不同产地连翘新鲜果实DN A提取方法和质量评价研究-论文.pdf

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1、世界中西医结合杂志2014年第9卷第7期WorldJournalofIntegratedTraditionalandWesternMedicine2014，V。1．9，No．7‘723··药物研究·不同产地连翘新鲜果实DNA提取方法和质量评价研究吴婷米丽华张淑蓉【摘要】目的建立连翘新鲜果实中高质量DNA的提取方法，为从分子水平研究和评价连翘药材质量奠定基础。方法采用改良的CTAB法提取连翘的总DNA，应用琼脂糖凝胶电泳法、分光光度法与PCR法对连翘DNA产率和质量进行检测评价。结果14批连翘药材核酸蛋白仪测定值A260／A280均在1．7～1．

2、9之间，改良CTAB法提取的连翘总DNA浓度较大，干扰较小，较高质量的DNA可进行PCR扩增，1％琼脂糖凝胶电泳之后用紫外成像仪观察结果正常。结论改良CTAB法适合连翘新鲜果实中DNA的提取，方法简单可靠。【关键词】连翘；DNA；PCR；RAPD【中图分类号】R282．5【文献标识码】A【DOI】10．13935／j．cnki．sjzx．140715StudyonDNAExtractionMethodandQualityEvaluati0nofForsythiaFreshFruitofDifferentPlacesWUTing．MILi—hua

3、．ZHANGShu—rong(ShanxiUniversityofTraditionalChineseMedicine．TaiyuanShanxi030024)【Abstract】ObjectiveToestablishtheextractionmethodofhighqualityDNAinforsythiafreshfruitSOastolaythefoundationformolecularresearchandevaluationofforsythiamedicalmaterialquality．Meth．odsThemodifiedC

4、TABmethodwasadopted1oextractthetotalDNAofforsythia．Theagarosegelelectro—phoresis(AGE)，spectrophotometryandPCRmethodwereusedtoevaluateforsythiaDNAproductionandquality．ResultsA260／A280valueofproteinnucleicacidanalyzerwas1．7t01．9forall14batchesoffor．sythia．Theconcentrationoftot

5、alDNAextractedwithmodifiedCTABwashigherandtheinterferencewasless．PCRproliferationwasappliedtoDNAofhigherquality．andtheresultwasnormalundertheobservationwithultravioletimagerafter1％AGE．ConclusionThemodifiedCTABisapplicableforDNAextractionofforsythiafreshfruit．ThismethodiSsimp

6、leandreliable．【Keywords】Forsythia；DNA；PCR；RAPD连翘为木犀科植物连翘Forsythiasuspensa进行综合评价，为从分子水平上进行不同产地的连(Thunb．)Vahl的干燥果实，具有清热解毒、消痈散翘的鉴别及道地性的研究奠定基础。结的功效，是著名方剂“银翘散”“清官汤”“清营实验材料汤”等的主药之一。现代药理研究表明¨-4j连翘具有抗菌、抗病毒、抗炎、解热、抗肝损伤、抗肿瘤等作1．实验样品：样品为2012年7～8月在山西、陕用，临床多用于治疗流行性感冒、急性肾炎、紫癜、西、河北与河南采集的连翘新鲜

7、果实，经山西中医肺脓肿、视网膜出血和糖尿病等。在分子水平上的学院中药鉴定教研室裴香萍副教授鉴定均为For．研究，目前连翘DNA的提取多集中于连翘干燥叶片sythiasuspense(Thunb．)Vahl，一76℃冷藏保存。药或新鲜叶片J，从连翘新鲜果实中提取DNA鲜见材情况，结果见表1。报道。本实验采用改良的CTAB法从不同产地连翘2．实验试剂：cTAB(Amresco)，PVP(Amresco)，新鲜果实中提取DNA，采用琼脂糖凝胶电泳方法、Tris(BBI)，EDTA—Na(BBI)，AgaroseVI(BBI)，随分光光度法与PCR技术

8、对提取的DNA产率和质量机引物(Sangon)，Taq酶(TaKaRa)，dNTP(TaKa—Ra)，p～巯基乙醇(BBI)，其余试剂均为分析纯。基金