兔泪腺内干细胞的体外分离及鉴定-论文.pdf

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1、第35卷第3期中山大学学报(医学科学版)Vo1．35No．32014年5月JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES)Mav．2014兔泪腺内干细胞的体外分离及鉴定李丽丽，王泳，刘良平，曾美珍，钟兴武(1．中山大学中山眼科中心，广东广州510060；2．中山大学海南眼科医院，海南海口570311)摘要：【目的】从正常兔泪腺组织及泪腺上皮细胞中分离及培养干细胞并鉴定。【方法】取4周龄左右的新西兰大白兔(0．5～1．0kg)，麻醉后取双眼主泪腺组织，右眼泪腺用于石蜡切片并行免疫组织化学检查，左眼泪腺予酶消化法分离培

2、养并进一步纯化泪腺上皮细胞。首先，免疫组化检测兔泪腺组织切片中的ATP—bindingcassettesub—familyGmember2(ABCG2)，巢蛋白(nestin)，Tumorprotein63(P63)，O1．一平滑肌肌动蛋白(SMA)，波形蛋白(vimentin)等干细胞的标志物表达阳性的部位。其次，泪腺上皮细胞先以PeterCompleteMedium(PCM)培养基培养，待出现梭形细胞后，更换Dulbecco'sModifiedEagleMedium(DMEM)培养基以常规分离培养干细胞。分离出的细胞取第三代用于免疫荧光检测ABCG2，n

3、estin，P63，—SMA，vimentin等干细胞的标志物，同时进行成脂，成骨诱导分化。【结果】兔泪腺组织免疫组织化学检查存在ABCG2，nestin，P63，仅一SMA，vimentin阳性的细胞，成功分离该细胞后，该细胞可表达ABCG2，nestin，P63，Ot—SMA，vimentin干细胞的标志，并可成功诱导其分化为脂肪细胞及骨细胞。【结论】兔泪腺组织中存在具有干细胞特征的细胞并能诱导分化，该细胞有望成为泪腺自我修复及重建的种子细胞，成为干眼临床治疗的新手段。关键词：泪腺；干细胞；干眼：兔：分离与鉴定中图分类号：R77文献标志码：A文章编号：1

4、672—3554(2014)03—0438—07IsolationandidentificationofStemCellsfromRabbitLacrimalGlandinVitroULi—li，WANGYong，LIULiang—ping，ZENGMei—zhen，ZHONGXing—WU'(1．StateKeyLaboratoryofOphthalmology，ZhongshanOphthalmicCenter，SunYat—senUniversity，Guangzhou510060，China；HainanEyeHospital，ZhongshanOp

5、hthalmicCenter，SunYat—SenUniversity，Hainan570311，China)Abstract：【Objective】Toisolateandidenti~thestemcellsfromrabbitlacrimalglandandlacrimalglandepithelialcellsinvitro．【Methods】Lacrimalglandwasdissectedoutfromabout4weeksoldNewZealandwhitemalerabbitswhichweighed0．5—1．0kg．Therightlac

6、rimalglandwasfixedandembeddedinparafinforhistology，andtheleftonewasdigestedforisolatingtheepithelialcellsoflacrimalgland．Firstly，ABCG2，P63，nestin，vimentin，and一SMAwereemployedtofindoutiftherearestemcellsinlacrimalgland．Secondly，StemcellswereisolatedafterdigestionfromLGandculturedinP

7、eterCompleteMedium(PCM)．After3days，whenthespindlecellsappeared，stemcellsweretransferredtoDulbeccoSModifiedEagleMedium(DMEM)，thencuhuredandpassagedthesecellsabout3daysperpassage，thepassage3cellswereexaminedfortheexpressionofstemcellsmarkersbyimmuno?uorescence(IF)，however，theirabilit

8、ytoosteogenicandadipogenic