筛选丙型肝炎病毒1b型非结构蛋白4B慢病毒LO2稳定株差异表达基因和基因通路-论文.pdf

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1、，臻勰0震岛2吣39(2)脚／／一cs嘶ed．org；http：／／xbyx删．netDOI：10．11817／j．issn．1672—7347．2014．02．002http：／／xbyx．xysm．net／xbwk／fileup／PDF／201402117．pdf筛选丙型肝炎病毒

2、b型非结构蛋白4B慢病毒L02稳定株差异表达基因和基因通路蒋孝华∽，谢玉桃1，蔡亚平3，雷创2，江波2，彭花2(1．中南大学湘雅医院感染科，长沙410087；2．南华大学附属第一医院感染科，湖南衡阳421001；3．南华大学流行病学教研室，湖南衡阳421001)【摘要]目的：筛选表达丙型肝

3、炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)lb型非结构蛋(h4B(nonstructuralprotein4B，NS4B)的慢病毒稳定细胞株L02．NS4B差异表达基因和基因通路，为深入研究HCVNS4B在慢性丙型肝炎和肝细胞癌发生中的作用及机制提供依据。方法：将已构建好的2株慢病毒稳定细胞株L02一NS4B和阴性对照慢病毒稳定细胞株L02．mkate2复苏扩增；应用HumanGene1．0ST芯片筛选出L02．NS4B与L02一mkate2差异表达基因。基于京都基因和基因组百科全书(kyotoandencyclopediaofgenesgenomes，KEGG)

4、数据库，利用Fisher精确检验和卡方检验，对差异基【挫参与的信号转导通路进行显著性分析。应用实时定量聚合酶链反应(real-timequantitativepolymerasechainreaction，real．time02cR)方法验证基因芯片中5个表达上调且与凋亡有关的基因，即蛋白激酶Cs结合蛋I二t(proteinkinaseCdeltabindingprotein，PRKCDBP)基因、肿瘤蛋p53(tumorproteinp53，TP53)基因、v-akt鼠科胸腺瘤病毒癌基因同源物1(v-aktmurinethymomaviraloncogenehomol

5、og1，AKTl)基因、含3个杆状病毒凋亡蛋白抑制因子重复序列(baculoviralLAPrepeatcontaining3，BIRC3)基因和B细胞淋巴瘤2样l基因(B．celllymphoma2-likel，BCL2L1)的mRn—ak平。结果：以L02-NS4B与L02一mkate2之间基因荧光强度的比值大于1．2或小于0．8为差异表达基因，在已知的28869个人类基因中L02．NS4B中有2682个差异表达基因，包括1446个基因表达上调和1236个基因表达下调。上调基因参与的显著性信号转导通路4l项，主要有凋亡通路、细胞外基质受体相互作用通路、细胞周期通路、

6、癌症通路和Toll样受体信号通路等；下调基因参与的显著性信号转导通路20项，主要有癌症通路、Wnt信号通路和细胞周期通路等。Real—timeQ．PCR验证5个表达上调基因中有3个基因表达变化与基因芯片结果一致，分别是AKTl，BIRC3和BCL2L1，吻合率为60％。结论：HCVNS4B可以调节L02细胞中与细胞凋亡、细胞周期和细胞增殖等有关的多种基因表达，主要影响与细胞凋亡、细胞周期和癌症相关的信号转导通路。[关键词】丙型肝炎病毒；非结构蛋白4B；基因芯片；慢病毒Screeningofdifferentiallyexpressedgenesandgenepathwa

7、ysinhepatitisCvirusIbtypenonstructuralprotein4BstablyexpressedL02celllineJL心GXiaohual⋯，XIEYuta01，CA／Yapin93，LEIChuan92，JIANGB02，PENGHua2化DepartmentofInfectiousDiseases,XiangyaHospitalofCentralSouthUniversity,Changsha410087；2．Depat；mentofInfectiousDiseases,theFirstAfliliatedHospitalofUniv

8、ersityofSouthChina,HengyangHunan421001；3．DepartmentofEpidemiology,UniversityofSouthChina,HengyangHunan421001JChina)收稿日期(Dateofreception)：2013—09—25作者简介(Biography)：蒋孝华，博士研究生，主任医师，主要从事病毒性肝炎的基础和临床研究。通信作者(Correspondingauthor)：谢玉桃，Email：dream．03．08@126．corn118中南大学学报(医学版)，2014，