海带表面降油细菌的分离鉴定及降油性能研究-论文.pdf

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1、《河北渔业~2014年第7期(总第247期)o研究与探讨DOI：10．3969／j．issn．1004—6755．2014．07．004海带表面降油细菌的分离鉴定及降油性能研究郭伟成，李作扬，王斌，周文君，张凯，常安妮(大连海洋大学，辽宁省高校海洋生物资源可持续利用重点实验室，辽宁大连116023)摘要：用柴油为唯一碳源的培养基选择分离海带表面具有降解柴油性能的细菌；对分离菌株进行了形态学、生理生化特性以及16SrDNA序列分析并测定其生长特性；测定了接菌不同浓度(7×10cfu／mL、7×1O。cfu／mL、7×10。cfu／mL)分离菌对柴油的降解率；另外，测定了加入不同浓度

2、葡萄糖(O．5g／L、1g／L、2g／L、4g／L、6g／L、8g／L、10g／L)作用7d后分离菌对柴油的降解率。结果显示：从海带表面分离到2株降油细菌，编号为：HD一4和HD一6。HD一4菌株菌落形态圆形、直径1．5mm、黄色、不透明、边缘整齐，HD一6菌株菌落圆形，直径1．0mm，浅黄色、透明、边缘整齐。两株菌均为革兰氏阴性短杆菌。生理生化特征和16SrDNA序列分析确定HI)～4菌株为假交替单胞菌(Pseudoalteromonassp．)，其16SrDNA同源性为99；HD一6菌株为交替单胞菌(Alteromonas—sp．)，其16SrDNA同源性为98。2株菌最适生

3、长温度均为15℃。HD一4和HD一6最适生长pH分别为9和8。适宜NaC1浓度分别为2和4；在25℃振荡培养(150r／rain)7d，接菌量为7×10cfu／mL、7×10cfu／mL、7×10。cfu／mL时，HD一4对柴油的初始降解率分别为8．0，22。1和27．6；HD一6初始降解率分别为23．7、38．8和43．2。加入葡萄糖后2株菌的降油率均有所增高，加入4g／L葡萄糖时达最高值，3个接种浓度下HD一4菌株分别为85．4、82．3和8O．4，HD一6菌株分别为86．8、93．7和89．3。当接菌量为7×10cfu／mL，HD一4在葡萄糖含量为4g／L时作用7d，降油率

4、可达到最大值86．72，HD一6菌株在葡萄糖浓度6g／L达到最大值67．64。葡萄糖浓度超过4g／L和6g／L时HD～4和HD一6菌株的降油性能有所下降。关键词：石油降解菌；海带；细菌鉴定；降油性近年来，经济的高速发展使得对能源需求日物进行研究。Radwan[9等发现，大量的石油分解益增加，而以化石能源为主的能源结构带来了海菌附着于多种大型海藻上，这种藻菌共同作用对洋石油开采和海上石油运输行业的大规模发展，石油类污染物的降解有明显效果。本研究通过分而在石油开采、运输过程中导致的海洋石油类污离海带表面的附着微生物，并从中筛选出具有降染随之成为世界性的问题。根据国际海事组织的油性能的

5、菌株，为制备用于海洋石油污染修复的统计，全球每年流人海洋的石油数以千万吨计口]，复合菌剂提供菌种，同时也为探索以海洋大型藻特别是在一些海湾，由于其独特的半封闭水域特类为载体强化定植降油细菌用于海洋环境的石油征，溢油事故一旦发生就将会导致可怕的生态危污染修复奠定基础。机[2]。据联合国有关组织统计，每年由于海上油1实验材料与方法井井喷事故和油轮事故造成的溢油高达220万tl3]。如何治理和修复被石油污染的海洋环境及1．1样品来源和培养基被其破坏的生态系统已经成为当下研究的热点。海带样品采自大连黑石礁潮间带，菌株初筛微生物修复是目前研究最多、应用也最为广泛的选用2216E固体培养基，

6、复筛选用柴油平板培养一种生物修复方法。国内外众多研究者对清除石基，测量菌种柴油降解率选用基础无机盐培油污染微生物的筛选鉴定、生长特性、菌株选育、养基L4。降解原理、降解性能、影响因素等方面进行了大量柴油平板培养基：基础无机盐培养基1000研究[4]。目前有报道从耐受石油污染的小型藻mL、吐温8O1mL、琼脂粉15g、0号柴油10mL类如蓝藻和大型藻类如江篱上筛选降解石油微生(市售0号柴油，121℃高压灭菌后待用)，pH一1】一《河北渔业~2014年第7期(总第247期)o研究与探讨7．2，121℃高压灭菌20rain。一组。对照组为未接菌的培养基，以波长为600基础无机盐培养基：

7、氯化铵0．5g、氯化钠20nm，采用分光光度法测量实验组的吸光值g、磷酸氢二钾1g、磷酸二氢钾0．5g、硫酸镁0．5(OD600nm)。以培养温度为横坐标，吸光值为纵g、氯化钾0一g、硫酸铁0．01g、氯化钙0．002g、坐标作图，得到不同温度条件下石油降解菌的生纯水1000mL，PH7．2，121℃高压灭菌20rain。长特性。1．2降油细菌的分离和纯化1．6．2pH将目标菌株用2216E液体培养基活首先将刮取的海带表皮组织样品置于5mL化24h后，接种到5mL29／6NaC1