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1、第18卷第1期实验动物科学与管理Vol.18No.12001年3月LABORATORYANIMALSCIENCEANDADMINSTRATIONMar.2001小鼠胚胎移植技术方法比较管彤,王凤山,王静,王晓军,于国德,杨梦礼(天津市劳动卫生职业病研究所,天津300204)摘要:以近交系小鼠C57BL6J、BDF1小鼠作为供体胚小鼠,封闭群昆明种小鼠作为代母,对实验小鼠胚胎移植的三种方法,即:对小鼠受精卵(或2个细胞期胚)经由代母输卵管口移植、经由代母输卵管壁移植及对小鼠进行子宫移植(8细胞期胚)的方法了进行实验研究,并
2、对各方法适于使用的动物对象、实验要求、产仔率、优势与不足等做了进一步的探讨,为今后的实验动物与动物实验提供参考依据。关键词:近交系小鼠;输卵管口(壁);移植;子宫移植中图分类号:S865.13文献标识码:A文章编号:1006-6179(2001)01-0029-03自五十年代以来人类建立了受精卵和早期胚胎1.2试剂的采集技术之后,很快就完成了早期胚向代母体内PMSG(pregnantmareserumgonadotropin)、HCG输卵管及子宫移植的胚胎移植技术的开发和研(humanchorionicgonadotro
3、pin)、胚胎移植用Injection[1]究。小鼠的胚胎移植技术对于实验动物学研究及Medium培养液、M2培养基等。生命科学研究具有重要价值。人类由小鼠进行发育1.3假孕代母的准备生物学研究,包括胚胎的发生、发育、突变基因的研1.3.1昆明种雄性小鼠的结扎究、转基因动物的研究、基因打靶技术及小鼠胚胎冷为输卵管移植及子宫移植用代母(昆明种封闭冻种子库技术等涉及胚胎体外操作的各种研究,均群小鼠)交配用的雄性昆明种小鼠进行输精管结扎需要进行胚胎移植入代母体内来完成。按照胚胎发手术,以便制备假孕代母。进行输精管结扎手术的[2
4、]生的阶段不同,移植部位也不同。1～2个细胞期雄性昆明种小鼠应提前三周施行手术,术后备用。胚胎进行输卵管口移植,8细胞期至桑椹期胚进行1.3.2制备假孕代母[3]子宫移植。1992年,日本学者Nakagata又报道了胚胎移植前一日(子宫移植,前三日)将已施行经由输卵管壁进行输卵管移植的技术,以解决移植输精管结扎手术术后三周的昆明种雄性小鼠以1∶2中一些代母品系输卵管口较小、较短的问题。与其雌性小鼠进行同笼交配,次日检查阴道栓有无,本文主要是将此三种移植方法引入,使之在本以阴道栓形成者作为移植用代母。实验室成为常规后,将其
5、应用于实验小鼠并进行了1.4卵的采集[4]方法上的比较,重点比较了方法上的难易程度、产仔1.4.1超排卵率、方法选择的前提因素。取出生后8～10周的C57BL6J及BDF1雌性小鼠进行PMSG处理(腹腔注射,5IU只),48h后进行1材料与方法HCG超排卵处理,方法、剂量相同,HCG处理14～17h后可进行受精卵的采集(子宫移植,为HCG处理1.1实验动物后第三日)。实验动物作为参比对照的成年近交系C57BL6J1.4.2交配小鼠、BDF1小鼠(♀C57BL6J×♂DBA2)和作为代母取已注射PMS、HCG后的C57BL
6、6J、BDF1雌性的昆明种封闭群小鼠。小鼠与其相应的C57BL6J、BDF1雌性小鼠进行同笼收稿日期:2000-07-07第一作者简介:管彤(1968-),女,助理研究员,主要从事野生小鼠资源开发及实验小鼠胚胎毒理学研究。·30·实验动物科学与管理2001年(第18卷)第1期相配,比例为1∶1。后,剪开毛皮层、真皮层,镜下取出卵巢部,剪开卵巢[5]1.4.3受精卵的采集(无菌条件下)膜,将2个细胞期胚经代母输卵管伞口移植入代母a.取同笼相配后阴道栓阳性的雌性C57BL6J、输卵管中。将卵巢部轻推小鼠体内,进行真皮毛皮BD
7、F1小鼠,断椎处死后仰面(腹部朝上)置于解剖台术后缝和,消毒伤口后,注意保温,第二日观察至苏上,酒精消毒后剪开外皮、真皮、打开腹腔,剪下卵醒后置于小鼠饲育室中至仔鼠出生。[3]巢、输卵管连同输卵管壶腹部后,置于盛有PBS的1.5.2输卵管壁移植平皿中,镜下找出输卵管的壶腹部并用游丝镊子撕麻醉代母并进行胚胎移植显微手术。消毒杀菌破,使其中的受精卵释放到带有透明质酸酶的培养后,剪开毛皮层、真皮层,镜下取出卵巢部,剪开卵液中,用受精卵采集毛细管将培养液中的受精卵转膜,确认输卵管伞端后,在输卵管伞端至壶腹部之间移至盛有三滴(40
8、0ul滴)受精卵培养液平皿中的一靠近壶腹部13处的输卵管壁切一斜口(250μm左滴,用同样方式再洗二次后最终将受精卵置于微滴右),将受精卵经由此剪开的斜口移植入壶腹部内。培养液(50ul滴)中,放入37℃、5%CO2中温育3～4将卵巢部轻推小鼠体内,进行真皮毛皮术后缝和,消h,等待移植。毒伤口后,注意保温,第二日观察
