产纤维素酶的解淀粉芽孢杆菌分离鉴定及酶学性质研究-论文.pdf

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1、第32卷第3期食品科学技术学报Vo1．32No．32014年5月JournalofFoodScienceandTechnologyMav201443doi：10．3969／j．issn．2095—6002．2014．03．008文章编号：2095—6002(2014)03-0043-05引用格式：崔海洋，程仕伟，黄田红，等．产纤维素酶的解淀粉芽孢杆菌分离鉴定及酶学性质研究．食品科学技术学报，2014，32(3)：43—47．CUIHaiyang，CHENGShiwei，HUANGTianhong，e

2、ta1．ScreeningandidentifyingofBacillusamyloliquefaciensforcellulaseproductionanditsenzymaticcharacters．JournalofFoodScienceandTechnology，2014，32(3)：43—47．产纤维素酶的解淀粉芽孢杆菌分离鉴定及酶学性质研究崔海洋，程仕伟，黄田红，李秀娟，杨立红，陈国忠(鲁东大学生命科学学院，山东烟台264025)摘要：对一株产纤维素酶菌株进行分离鉴定，并对其酶学特性进行

3、了初步研究．刚果红染色法筛选产纤维素酶菌株B16，采用形态观察、生理生化指标和16SrDNA确定其菌属来源，分析纤维素酶的最适反应pH值和温度、酸碱和热稳定性、金属离子对酶活性的影响，最后考察纤维素酶系的分布．结果表明：筛选菌株为解淀粉芽孢杆菌，其较适反应温度为30℃，较适pH8．0，在10～60℃呈高稳定性，在pH5～8时稳定性较强，Mn“和Ba“是该酶的激活因子．除微晶纤维素酶活力(16．39U／mL)稍弱外，滤纸酶(70．37U／mL)、一葡萄糖苷酶(131．55U／mL)、羧甲基纤维素酶(3

4、07．23U／mL)活力均相对较高．结果表明，该酶在饲料添加剂方面具有应用潜力．关键词：纤维素酶；分离鉴定；解淀粉芽孢杆菌；酶学性质中图分类号：TS235；Q814．4文献标志码：A纤维素酶是由作用方式不同但能协同催化降解中受到广泛重视．本文通过对高产纤维素酶的一纤维素的3类酶组成的酶系，可降解纤维素生成低株细菌进行分离鉴定及催化特性研究，为后期发聚糖或葡萄糖⋯．包括作用于纤维素分子内部非结酵生产及其在饲料添加剂方面的实际应用提供数晶区的内切葡萄糖苷酶(又称羧甲基纤维素酶)，作据支撑．用于线状分子末

5、端的外切葡萄糖苷酶(又称纤维二糖水解酶或微晶纤维素酶)和将纤维二糖水解成葡1材料与方法萄糖的．葡萄糖苷酶．1．1材料纤维素酶广泛应用于饲料、食品、纺织、造纸水杨素和3，5一二硝基水杨酸，上海生物工程公和洗涤等行业。，作为一种绿色饲料添加剂，将饲料中的部分纤维素降解成可消化吸收的还原司；微晶纤维素，Sigma公司；细菌基因组抽提试剂糖，提高饲料利用率．其营养机理“：补充内盒，Axygen公司；EXTaq酶和dNTP，TaKaRa；Marker源酶的不足，溶解植物细胞壁促进吸收；减低动物DL5000，广

6、州东盛科技公司．其余试剂均为分析纯胃肠道黏稠度，消除抗营养因子；降低有害微生物或生物纯．的附着生长；维持小肠绒毛形态完整等．1．2培养基多种微生物均可产纤维素酶，其中细菌来源菌种保藏培养基：酵母粉5g／L，蛋白胨10g／L，的纤维素酶具有耐碱、耐热性等优良催化特性，培NaC110g／L，琼脂20g／L，pH7．0．121℃下灭菌15养周期短且条件可控¨，因而在饲料用酶的研究mn．收稿日期：2013—08—07基金项目：山东省高等学校科技计划项目(J12LD02)．作者简介：崔海洋，男，硕士研究生，研

7、究方向为酶工程；程仕伟，男，博士，主要从事生物化工方面的研究．通讯作者食品科学技术学报2014年5月筛选培养基：CMC10g／L，酵母粉5g／L，微晶纤维素酶(c．)活力：1mL微晶纤维素Na2CO33g／L，MgSO4·7H2O0．1g／L，FeSO4·7H2O溶液(1％)加1mL稀释酶液，50℃下反应120rain5mg／L，MnSO5mg／L，琼脂20g／L，pH9．0．121℃后，离心去不溶物，其余同CMCase测定．下灭菌15rain．1．3．5酶学性质初步研究活化培养基：酵母粉5g／L，

8、蛋白胨10g／L，NaC1测定CMCase活力作酶学性质的研究指标．10g／L，pH7．0．121℃下灭菌15min．1．3．5．1最适温度及热稳定性发酵培养基：葡萄糖40g／L，大豆蛋白胨8g／L，不同温度下反应15rain后测定CMCase酶活酵母粉6g／L，MgSO4·7H2O4g／L，MnSO44g／L，性，确定最适反应温度．酶液在不同温度条件下KH2PO410g／L，NaH2PO48g／L，pH6．0．115oC下(pH8．0的缓冲液)保存60min后，测定