真核细胞翻译起始因子4E 对鼻咽癌侵袭转移的作用.pdf

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1、检验医学与临床2Ol4年7月第11卷第14期LabMedClin，July2014，Vo1．11，No．14·I临床研究·真核细胞翻译起始因子4E对鼻咽癌侵袭转移的作用李哲，翁玉玲。，刘艳明(1．广东省东莞市大朗医院523770；2．广东省东莞市人民医院523000)【摘要】目的分析真核细胞翻译起始因子4E(elF4E)对鼻咽癌侵袭转移的促进作用，为临床评估鼻咽癌侵袭转移提供新的筛查靶点。方法利用细胞试验研究eIF4E在鼻咽癌细胞中高表达的机制，和被人潜伏膜蛋白(IMP1)诱导转录活化的机制，以及转录活化对鼻咽

2、癌细胞侵袭转移的影响。结果elF4E可以被LMP1诱导转录活化，vector组elF4E的mRNA表达水平与MOCK组间差异无统计学意义(P>0．05)。IMP1组与vector组比较，elF4E的mRNA表达水平显著上升，差异有统计学意义(P<0．05)。经灰度分析，MOCK组与vector组eIF4E的mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0．05)，IMP1组为vector组的2．173倍。差异有统计学意义(P<0．05)。结论elF4E经IMP1诱导转录活化后，可促进鼻咽癌的侵袭转移，提示IMP1是致癌

3、效应信号传递的一个关键节点，可以作为临床评估鼻咽癌侵袭转移的一个新的筛查靶点。【关键词】真核细胞翻译起始因子；鼻咽癌；侵袭转移DOI：10．3969／j．issn．1672-9455．2014．14．031文献标志码：A文章编号：1672—9455(2014)14-1960—02在我国，鼻咽癌的发病率较高，是一种较为常见的恶性肿l_4统计学方法采用SPSS15．0统计软件对研究所得数据瘤Ⅲ，尤其在我国的广东和湖南等地区，发病率极高。鼻咽癌进行统一录入和分析，计量资料采用t检验，计数资料采用还具有极易侵袭转移的特

4、点，有较高的病死率。因此，临床积检验。以P0．05)。LMP1组与vector组鼻咽癌侵袭转

5、移的促进作用，为临床评估鼻咽癌侵袭转移提供比较，elF4E的mRNA水平显著上升，差异有统计学意义(P<新的筛查靶点，现将结果报道如下。0．05)1材料与方法表1瞬时转染LMP1对CNE1细胞eIF4E的mRNA1．1材料(1)细胞株。将高分化鼻咽癌细胞株(CNE1)和低表达水平的影响分化鼻咽癌细胞株(CNE2)作为研究对象，B95—8细胞作为对照。其中CNE1、EBV呈阴性，CNE2初建时EBV呈阳性，以及EBV感染的永生化绒猴外周血淋巴细胞株B95—8细胞，EBV呈阳性，且I，MP1呈强阳性表达。(2)主要

6、试剂与仪器。BeyoECIPlus、光学显微镜与梯度聚合酶链反应(PCR)扩增仪Mastercycler等。注：GAPDH为磷酸甘油醛脱氢酶。1．2分组取对数期CNE1细胞进行接种，24h后转染CNE1细胞，标记为IMP1组和vector组，并设置未转染2．2电泳灰度比较经灰度分析屁示，MOCK组与vector组M0CK组。elF4E表达水平差异无统计学意义(P>0．05)。vector组上j1．3方法(1)转染。细胞培养后，取对数期的细胞进行接种IMP1组eIF4E，差异有统计学意义(P

7、和培养。进行双荧光素酶试验．用24孔板进行转染，CCK一8增表2lMP1转染后CNE1细胞elF4EPCR产物殖试验则选用96孑L板进行转染，实时荧光定量(Real—time)PAGE电泳灰度比较PCR和Westernblot利用6孔板转染。(2)提取RNA。采用TRIzol法提取细胞总RNA，并利用核酸蛋白测量仪检测样品的纯度和浓度。(3)逆转录PCR检测。逆转录反应合成cD—NA，并进行Real—timePCR。(4)Westernblot试验。对蛋白条带的灰度进行测定，并将目标条带灰度值与对应的内参灰度值

8、进行比较，比值作为分析指标。(5)提取DNA。使用MicroE—注：PAGE为聚丙烯酰胺凝胶电泳。luteGenomicDNA提取试剂盒进行提取。(6)筛选。制备IMP1基因RNA干扰质粒，并筛选出有效靶点。(7)电泳。2．3eIF4E与鼻咽癌侵袭转移关系分析IMP1转染CNE1进行核酸聚丙烯酰胺凝胶电泳试验，并进行银染鉴定。细胞，细胞侵袭转移活性显著高于B95—8细胞组，差异有统计*