真核细胞翻译起始因子亚基eif3g的核定位及相互作用核蛋白的研究

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1、分类号：：单位代码学号：硕士学位论文中文论文题目：其核细胞翻译起始因子亚基核定位及相互作用核蛋白的研究—英文论文题目：申请人姓名：郑俏丽指导教师：专业名称：肿瘤学研究方向：肿瘤病因与发病机制所在学院：医学部论文提交日期年月真核细胞翻译起始因子亚基的核定位及相互作用核蛋白的研究论文作者签名：指导教师签名：论文评阅人滕理送教授浙江大学医学院附属第一医院评阅人王晓稼主任医师浙江省肿瘤医院评阅人贾振宇研究员浙江省医学科学院答辩委员会主席：胡汛教授浙江大学肿瘤研究所委员苏丹研究员浙江省肿瘤研究所委员杨蓓落教授浙江大学医学院附属第二医院答辩日期：年月日浙江大学研究生学位论文独创性

2、声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得浙江大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江大学有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手

3、段保存、汇编学位论文。保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名导师签名：签字日期：年月日签字日期：年；月日浙江大学硕士学位论文致谢致谢衷心感谢我的导师曹江老师两年多来对我的悉心指导和谆谆教诲。在科研方面曹老师带领我进入科学殿堂，培养了我严谨的科研态度，科学的思维方式，在实验实践中又给予我很多的指导，给予我鼓励支持和宽容理解。在生活方面和我耐心交流，力所能及地帮助我。同时也支持我学习临床技能，学习临床应用，在今后我将更加努力的学习和工作来回报恩师对我的悉心栽培。感谢实验室的张行、叶景佳、李春春、谢雨琼、王馥梅、俞韩啸、陈丽红、徐珍珍、吴凌燕等老师的帮助。感谢

4、我的同学吴海建、严毛晓、徐馨、俞卿、李英、郑丹丹、郭立文、姜晓侠等给我的鼓励和支持。感谢浙江省医学科学院贾振宇老师的指导和刘昊同学的帮助。感谢我的家人。再次致以深深的谢意。浙江大学硕士学位论文中女摘要真核细胞翻译起始因子亚基的核定位及相互作用核蛋白的研究浙江大学医学院肿瘤学专业级硕士研究生郑俏丽导师曹江中文摘要真核翻译起始因子是一类重要的细胞内功能蛋白，形成蛋白质翻译起始复合物，引导蛋白质合成的起始。已明确的有六种（，每种由多个亚基组成。近年来不断有研究发现一些的亚基在肿瘤细胞中存在异常表达的现象，并且这些亚基表达的异常与肿瘤的恶性行为相关，如在肿瘤细胞中表达异常升高

5、，可以作为一个有效的治疗靶点，因此在肿瘤的发生发展中的作用越来越受到人们的关注。是最大最复杂的一个真核翻译起始因子，是蛋白质翻译起始复合物中与其他翻译起始因子相互联系的中心蛋白因子之一。目前巳知由个亚基组成，分子量约为其各亚基按分子量递减分别命名为至。是的一个核心亚基，在翻译终止后的再起始过程中起着重要作用，并且该亚基还具有与细胞骨架蛋白和凋亡诱导因子相结合的位点。本课题组在前期实验中发现在耐药的白血病细胞中高表达，下调白血病细胞中的表达可以抑制白血病细胞的耐药性及生长；在乳腺癌临床标本中，的过表达与淋巴转移正相关。这些发现给我们进一步研究在肿瘤中的机制提供了依据，我

6、们设想在肿瘤中异常表迖的蛋白有可能通过非翻译起始相关的机制在肿瘤的发生发展中发挥了一定的作用。在本课题中，我们首先通过生物信息学手段预测了可能具有细胞核定位，进一步用实验验证了的核定位，并寻找、鉴定与之相互作用的核蛋白，为今浙江大学硕士学位论文中文摘要后的研究提供线索。我们通过核质分离技术结合、细胞免疫荧光染色验证了在细胞核中的存在，通过核蛋白免疫共沉淀结合质谱分析鉴定了与在细胞核中相互作用的蛋白质，包括不均一核糖核蛋白（，锌指蛋白（，和肌动蛋白（，并釆用了正反向的免疫共沉淀、化学交联、以及激光共聚焦共定位观察等多种技术进行了多方面验证。具体内容如下：预测并验证的细胞

7、核定位通过在线生物信息学工具地，’和预测的亚细胞定位及功能，通过核质分离后检测和激光共聚焦观察验证的亚细胞定位。四个生物信息学工具都预测了具有细胞核定位，预测了在细胞核中具有结合和等功能。细胞核蛋白的检测和细胞免疫荧光染色结合激光共聚焦观察都验证了具有细胞核定位。鉴定与相互作用的核蛋白为了进一步研究在细胞核中相互作用的蛋白质，我们构建了稳定过表迖的细胞株，分离细胞核并裂解获得核蛋白，以抗体进行免疫共沉淀，电泳分离后考马斯亮蓝染色，选取共沉淀的蛋白条带进行质谱分析鉴定。与对照相比，免疫共沉淀得到条较明显的蛋白条带，质谱分析鉴定分别为真核细胞翻译起始因子