木薯叶多酚氧化酶的提取及其酶学性质研究.pdf

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1、广东农业科学2014年第2期木薯叶多酚氧化酶的提取及其酶学性质研究侯杰，严东，马万良，杨洋(广西大学生命科学与技术学院，广西南宁530003)摘要：以木薯叶为原料，研究木薯叶多酚氧化酶(PPO)的最佳提取条件与酶学性质。结果表明，木薯叶PPO的最佳提取条件为磷酸缓冲液(PBS)的pH值6．8，料液比4mug，提取时间6h；木薯叶PPO酶促反应产物在399nm处有最大吸收峰，以邻苯二酚为底物的酶促反应的米氏常数=0_8mol／L，动力学方程为V=2000[$1／0．8+[】，该酶最适温度为37qC，最适pH值为7．0。关键

2、词：木薯叶；多酚氧化酶；提取；酶学性质中图分类号：TS201．1文献标识码：A文章编号：1004—874X(2014)02—0111-05'E一xt·ract·i‘onand1enzymat·i■cproderUJ●esOInPo1lyp●lleno■l-I一⋯oxidasefromcassavaleavesHOUJie，YANDong，MAWan—liang，YANGYang(CollegeofLifeScienceandTechnology,GuangxiUniversity,Nanning530003，China)

3、Abstract：Takingcassava(Manihotesculentleavesastherawmateria1．theoptimumextractionconditionsandenzymaticpropertiesofpolyphenoloxidase(PPO)fromcassavaleaveswerestudied．Theresultsshowedthat，theoptimalextractionconditionswereasfollow，pHvalueofPBSwas6．6，solid—liquidra

4、tiowas4mL／gandextractiontimewas6h．TheenzymaticreactionofPPOfromcassavaleavesshowedthat，themaximumabsorptionpickwasat399nm．TheMichaelisconstantm)was0．8mol／LandtheenzymatickineticequationwasV=2000[s]／o．8+[S]byusingcatecholassubstrate．Theoptimalreactiontemperatureof

5、PP0was37oCandoptimalpHvalueofPP0was7．0．Keywords：cassavaleaves；polyphenoloxidase(PPO)；extraction；enzymaticproperties木薯为大戟科(Euphorbiaceae)木薯属(Manihot)，1材料与方法别称木番薯，树薯。木薯有着很长的种植食用历史_1]，其在华南地区种植广泛，且需求量越来越高[2]，近年1．1试验材料在工业上也开始大量应用1。木薯叶中含有丰富的蛋供试木薯叶采摘于广西大学农场；邻苯二酚、无水白质【6l

6、，其中多酚氧化酶(PPO)活性很高。PPO在植硫酸铵、考马斯亮蓝G一250、考马斯亮蓝R一250、甘氨物、动物和微生物中广泛分布，由于容易检测，成为酸、冰乙酸、乙醇、氢氧化钠、盐酸等试剂均为分析纯。被较早研究的酶类之一l71。目前国内外对PPO的应FK—A(JJ一2)组织捣碎仪(金坛市晶玻实验仪器用主要集中在烟草加工_8l、茶叶加工_9l、固定化[10-13]及厂)；UV1240型紫外分光光度计(日本岛津公司)；离心酚类污水处理等几个方面。对植物中的PPO等酶机(BackmanCoulter)；78HW一1磁力搅拌器(杭

7、州仪表类的研究已有不少报道，但却极少有对木薯叶PPO电厂)；PHS一3C精密PH计(上海精密仪器仪表有限公提取与特性研究的报道。本研究确定了木薯叶PPO司)；HH一2型数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)；的最佳提取条件，并研究了部分酶学特性，旨在为利SB一1200超声波清洗仪(宁波新芝生物有限公司)。用木薯叶，发展农业生产，提高经济效益提供理论依1．2试验方法据1．2．1木薯叶PPO的提取称取100g新鲜木薯叶加入400mL经过4预冷的磷酸缓冲液(PBS)。用组织收稿日期：2013—08—17捣碎仪将上述混合物捣碎lra

8、in，置于4℃冰箱冷冻浸基金项目：广西自然科学基金(2010GXNSFC0l3004)提数小时。将浸提液用4层纱布过滤，弃去滤渣，滤液作者简介：侯杰(1989一)，男，在读硕士生，E—mail：867450494℃下12000r／min离心20min，取上清液即得木薯叶7@qq．tomPPO粗酶液]。通讯作者：杨洋(