组织-免疫荧光染色protocol.doc

《组织-免疫荧光染色protocol.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、组织免疫荧光步骤：1）取出切片，用0.01MPBS冲洗5min×3次；2）滴加10%正常山羊血清37℃封闭45min；3）吸去多余液体，加入抗TSHR的一抗（1：100），放入湿盒中，37℃孵育1h后置于4℃冰箱中过夜（保持在湿盒中）；4）0.01MPBS冲洗5min×3次；（至下一步开始要适度避光操作，防荧光淬灭！）5）在黑暗条件下加入山羊抗兔IgG-FITC（1：200），37℃温育45min；6）在黑暗条件下吸弃二抗(注：不再冲洗)，加入DAPI染液（2.5μg/ml），室温作用20min；7）在黑暗条件下0.01MPBS冲洗5min×6次；8）在黑暗条件下防荧光淬灭剂封片，

2、荧光显微镜下观察，用合适波段激发，照相保存实验结果。核实好下边的问题你就可以操作了：1、准备0.01MPBS500ml，冲洗时动作既要轻柔防脱片，又要保证冲洗彻底；2、抗TSHR的一抗用1：100，用抗体稀释液稀释；3、实验室有没有山羊抗兔IgG-FITC，使用浓度是1：200；4、DAPI染液（2.5μg/ml）实验室有吗？5、防荧光淬灭剂封片实验室有吗？