可溶性氮测定方法.pdf

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1、FNCPSL0075动物饲料可溶性氮的测定稀盐酸中用胃蛋白酶处理法F_NCP_SL_0075动物饲料—可溶性氮的测定—稀盐酸中用胃蛋白酶处理法1范围该国际标准规定了在稀盐酸中用胃蛋白酶处理后测定动物饲料可溶性氮含量的方法。该方法不能区别蛋白氮和非蛋白氮。注:用此方法得到的值同体内消化率没有直接关系。如果从实验结果中除去非蛋白氮，它的含量应该用一个适宜的方法测定。2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。在标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨，使用下列标准最新

2、版本的可能性。ISO5983：1997动物饲料中氮含量测定和粗蛋白质含量的计算——K氏法。ISO6498：1983动物饲料试样的制备。3原理0样品在胃蛋白酶稀盐酸溶液中于40C培养48h。悬浮液过滤并按照K氏方法即可测定滤液的氮含量也可测定滤器上残渣氮含量。4试剂只能使用认可的分析级试剂，蒸馏水或去离子水或至少同等纯度的水。所有试剂(除标准材料外)实际都应该是无氮化合物。4.1稀盐酸，c(HCl)=0.075mol/L。4.2胃蛋白酶，活性2.0U/mg与附录A中给出的定义一致。按附录A中规定的方法检查胃蛋白酶活性。4.3

3、胃蛋白酶盐酸溶液，酶活性约400U/L。在1L稀盐酸溶液中(4.1)溶解0.2g±0.001g胃蛋白酶。使用之前立即制备该溶液。如果胃蛋白酶活性偏离2.0U/mg，调节胃蛋白酶质量以便获得一个胃蛋白酶活性为400U/L的溶液。4.4盐酸，c(HCl)=7.5mol/L(ρ20=1.125g/ml)。5仪器设备一般实验室设备，特殊的如下。005.1水浴或培养葙，温度能维持在40C±1C。5.2K氏烧瓶，适宜容积。5.3滤纸，快速，耐酸。5.4蒸馏和滴定装置。6采样6.1散装产品采样方法根据堆型和体积大小分区设点，按货堆高度分

4、层采样。6.1.1分区设点：在货堆的不同方位选若干个采样区。各区设中心、四角五个点，货堆边缘的点在距边缘约50cm处。6.1.2采样：按区设点，先上后下逐点采样，各点采样数量一致。6.2散装采样方法散装或罐车在出口处根据采样量的需要，间隔采样。6.3袋装采样方法6.3.1采样包数：5包至10包逐包采样；10包以上选取10包采样；5包以下不采。采样包的选取参照6.1.2。6.3.2采样：将取样钎槽口朝下，从包的一角水平斜向插向包的对角，然后转动取样钎至槽口朝上取出，每包采样次数一致。或拆包采取。6.4成品出料口采样方法在出料

5、口采样，每10袋或间隔2min，取样铲采样。6.5样品的缩分将样品倒在清洁、光滑、平坦的桌面或光面硬纸上，充分混匀后将样品摊成平面正方形，然后以两条对角线为界分成四个三角形，取出其中两个对角三角形的样品，剩下的样品再按上述方法反复缩分，直至最后剩下的两个对顶三角形的样品接近平均样品所需的重量为止。实验室收到的样品的真实性和代表性以及在传送和贮存时不发生损坏是十分重要的。保存样品时应避免样品发生变质和变化。7试样制备按照ISO6498(即FNCPSL0067)制备试样。如果试样脂肪含量超过10%(m/m)，按照ISO6498

6、提取脂肪，计算(条款9)时要考虑提取的脂肪含量。8操作步骤8.1试料称取2g制备的试样，精确至0.001g。8.2培养0将试料置于500ml容量瓶中并加50ml事先加热到40C的胃蛋白酶溶液。振摇以避免结块。0检查悬浮液的pH值低于1.7。将烧瓶置于40C水浴或培养箱中放48h。8h、24h和32h后振摇。048h后加15ml盐酸并冷至20C。用水稀释至刻度，振摇并通过滤纸过滤。按8.3或8.4进行。8.3滤液氮含量的测定8.3.1有机物消化取250ml滤液转移到K氏烧瓶中，加入15g的硫酸钾，0.3g氧化铜或0.9~1.

7、2g五水硫酸铜。对于1g干物质的试料要加25ml硫酸,以后每增加1g干物质多加6~12ml。充分混合，确保试料完全润湿，混合并煮沸。保持溶液充分沸腾直至水分几乎全部蒸发。小心去除最后微量水，减低加热速度。液体变清澈后，继续加热1h，然后移开放冷。8.3.2蒸馏和滴定8.3.2.1氨的蒸馏小心加入250~350ml水,使硫酸盐全部溶解,如必要可将烧瓶放在热水加速溶解,回旋混合,冷却。加几粒浮石。注：对某些特定的样品,其硫酸盐不能完全溶于水中,此时建议,用较少的硫酸钾重新消解。向蒸馏装置的收集瓶中吸移25ml硫酸,根据试料预期

8、的氮含量,选择其浓度。加100~150ml的水加几滴混合指示剂，也可在收集瓶中移入250ml硼酸,加几滴混合指示剂。注：建议蒸馏中同时进行氨滴定,这样有助于确定蒸馏终点。将冷凝器末端插入收集瓶的溶液中,没入深度至少1cm。向消煮瓶中沿瓶壁慢慢加入100ml氢氧化钠溶液。立即将此烧瓶接入蒸馏装置。加热，使