红豆承气汤对胃癌细胞SGC-7901Ki-67、PTEN蛋白表达的影响-论文.pdf

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1、中国中医药科技2013年7月第2O卷第4期July2013Vo1．20No．4·361·红豆承气汤对胃癌细胞SGC一7901Ki一67、PTEN蛋白表达的影响木山广志王永生(浙江省宁波市中医院肿瘤科·宁波315010)摘要目的：观察红豆承气汤对胃癌细胞SGC一7901增殖的影响。方法：采用SGC一7901胃癌细胞株建立裸鼠人胃癌移植瘤模型，将50只裸鼠，随机分为5组，模型对照组、红豆承气汤低、中、高剂量组、5一Fu组，分组给予相应处理30天。免疫组化法检测各组裸鼠瘤组织I(i一67、EN蛋白表达。结果：与模型组比较，各药物组瘤组织l(i一67蛋白表达明显降

2、低(P<0．01)，PTEN蛋白表达明显增加。结论：红豆承气汤可促进抑癌基因PTEN蛋白表达，抑制肿瘤细胞增殖。主题词胃肿瘤／中医药疗法@红豆承气汤／治疗应用裸鼠胃癌是临床常见的恶性肿瘤，易转移、病死率高。对其裸鼠。生物学行为的评估主要以病理形态的观察为主，缺乏客观性2．2观察指标及测定处死裸鼠，取瘤组织经10％甲醛溶的标志物⋯。PTEN是一种具有磷酸酯酶活性的抑癌基因，液固定，石蜡包埋，3～4m厚连续切片，常规脱蜡，高温高压PTEN蛋白表达与胃癌等恶性肿瘤发生发展、生物学行为和下热抗原修复，严格按照免疫组织化学sP试剂盒操作步骤预后有密切的关系。本研究采

3、用免疫组化技术检测胃癌进行染色(Ki一67为兔来源的单克隆抗体，稀释度为1：75，组织PTEN蛋白的表达及其增殖相关蛋白I(i一67表达的变PTEN为小鼠来源的单克隆抗体，稀释度为1：100)，DAB显化及其红豆承气汤的干预作用，报告如下。色，苏木素复染。以已知l(j一67、PTEN阳性胃癌组织切片1材料作阳性对照，PBS代替一抗设阴性对照。I．1实验动物BMb／C裸鼠，5O只，1月龄，体重18～22g，阳性结果的判断和分析：免疫组织化学染色阳性为黄色雄性，由浙江中医药大学实验动物中心提供，质量合格许可或黄棕色，细胞核衬染呈蓝色。l(i一67阳性表达主要在

4、细证编号：SYXK(浙)2008—01115。胞核内，在200倍视野下计数3个视野，计数200个移植瘤1．2瘤株SGC一7901胃癌瘤株：浙江中医药大学提供。细胞中染色阳性的细胞数，换算成阳性标记指数。PTEN阳1．3药物红豆承气汤：由大黄、红豆杉、黄芪、白术、甘草性产物，定位于细胞质内；按照染色强度计分，0分为无色，1组成，水煎浓缩至0．4g／ml、0．8e,／ml、1．6g／ml。5一Fu：上海分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。按阳性细胞所占旭东海普药业有限公司，批号：H31020593，配制成1．00mg／百分比计分：0分为无阳性细胞，1分为阳

5、性细胞10％，2分IrIl稀释液。为阳性细胞12％～50％，3分为阳性细胞51％～75％，4分1．4主要试剂鼠抗人PTEN单克隆抗体、即用型sP试剂为阳性细胞>75％。染色强度与阳性细胞计分乘积0～2分盒及DAB显色试剂盒、EDTA抗原修复液：均购自北京中杉计为(一)，3～5分计为(+)，6～9分计为(++)，10～12金桥有限公司；兔抗人l(i一67单克隆抗体：购自上海长岛生分计为(+++)。物技术有限公司。2．3统计方法数据采用SPSS17．0软件包进行分析处理，2实验方法等级资料采用秩和检验(KruskM—WalisH)，计量资料采用2．1模型复制及

6、分组给药取传代后14天裸鼠，无菌操(±s)表示，采用单因素方差分析。作，剥取SGC一7901胃癌瘤株肿瘤组织块，制成单细胞悬3实验结果液，调整细胞浓度至1×10·ml一，台盼蓝染色实验示活细3．1各组裸鼠瘤组织l(i一67表达测定结果见表1。胞数大于95％。取50只实验裸鼠，将上述细胞悬液接种于表1各组裸鼠瘤组织Ki一67阳性表达率比较(±s)裸鼠右腋皮下(0．2ml／只)，随机分为5组：模型组、5一FU组、红豆承气汤高、中、低剂量组。接种后第2天开始灌胃，模型组：灌胃生理盐水0．4ml；5一FU组：腹腔注射5一Fu稀释液0．4mw；红豆承气汤高、中、低剂

7、量组分别灌注红豆承气汤(32、16、8g／kg)0．4ml，每天1次，饲养30天，处死所有·浙江省宁波市科技计划资助课题No．2009A09与模型组比较，P

8、能考虑高剂量泻下作用过于猛烈，耗伤机体的正气。故在治疗中运用“下法