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1、Vol.33高等学校化学学报No.62012年6月摇摇摇摇摇摇CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES摇摇摇摇摇摇1177~1181基于表面等离子体共振技术用鸡蛋黄抗体IgY测定人血清中转铁蛋白11,222211王春宇,冯摇锋,白云峰,陈泽忠,田茂忠,邱建丁,倪永年(1.南昌大学化学系,南昌330031;2.山西大同大学有机化学研究所,大同037009)摘要摇采用表面等离子体共振(SPR)方法,用鸡蛋黄抗体(IgY)取代传统免疫检测中哺乳动物抗体IgG作为识别分子偶
2、联于CM5传感芯片上,对人血清中的转铁蛋白进行了检测.考察了IgY在传感芯片上的偶联条件及芯片的再生条件.结果表明,在pH=4郾0,IgY浓度为100滋g/mL,流速为5滋L/min的最佳偶联条件下,SPR响应信号和转铁蛋白浓度在50~500ng/mL范围内具有良好的线性关系,检出限为39郾56ng/mL,对人血清样品检测的日间变异系数<8%,日内变异系数<5%,平均回收率为86郾22%~94郾51%.关键词摇表面等离子体共振;鸡蛋黄抗体;人血清;转铁蛋白中图分类号摇O657摇摇摇摇文献标识码摇A
3、摇摇摇摇DOI:10.3969/j.issn.0251鄄0790.2012.06.011[1]转铁蛋白是血清中结合并转运铁的茁球蛋白,血清转铁蛋白的含量变化可反映多种疾病,患有缺铁性贫血、急性肝炎及急性炎症的病人血清中转铁蛋白的含量会增多;而患有肾病综合征、肝硬化及恶性肿瘤等疾病时,人血清中转铁蛋白的含量会减少.传统的人血清中转铁蛋白含量的检测方法主[2][3][4][5]要有免疫比浊法、酶联免疫吸附法、放射免疫法及压电免疫分析法等.与这些方法相比,表面等离子体共振(Surfaceplasmonr
4、esonance,SPR)技术作为一项新的生物技术,具有无需对样品进行[6,7]处理、免标记、样品用量少和可快速实时检测生物分子相互作用的全过程等优点.传统检测方法中[8]用的抗体多为哺乳动物抗体IgG,而IgG能激活血清中的补体系统,进而影响抗原抗体的有效化合价;且IgG还会与血清中的类风湿因子和人抗鼠抗体等产生非特异性结合,在免疫检测中产生假阴性或假阳性结果.鸡蛋黄抗体(IgY)是从免疫母鸡所产鸡蛋的蛋黄中提取和纯化出来的抗体.与哺乳动物的IgG相比,IgY不与哺乳动物免疫球蛋白发生交叉反应,
5、不与类风湿因子、人抗鼠抗体或Fc受体结合,不会激活哺乳动物的补体系统,可以避免免疫检测中产生假阴性或假阳性现象;且IgY具有耐[9~13][14]热、耐酸、稳定及成本低等特点.Vikinge等通过实验证明,在基于SPR技术所进行的检测中,采用IgY作抗体可以降低非特异性吸附,避免假阴性和假阳性结果,改善SPR在人血清抗原检测中的应用.本文以鸡蛋黄抗体IgY代替哺乳动物抗体IgG用于SPR对人血清中转铁蛋白的实时检测,实验证明该方法简单可行,提供了用SPR检测血清抗原的新试剂和新方法,为高特异性、人
6、性化的蛋黄抗体IgY在生化检测中的进一步应用提供了理论依据.1摇实验部分1.1摇仪器与试剂BIAcoreX型表面等离子体共振仪(PharmaciaBiosensorAB公司).CM5型传感芯片,HBS鄄EP缓冲溶液(pH=7郾4,0郾01mol/LHEPES+0郾15mol/LNaCl+3mmol/LEDTA+0郾05%SurfactantP20),pH=4郾0,4郾5,5郾0和5郾5的醋酸钠缓冲溶液,盐酸乙醇胺溶液和pH=1郾5,1郾7,2郾0,2郾5和3郾0的10收稿日期:2011鄄07鄄21
7、.基金项目:国家自然科学基金(批准号:21175085)和山西省自然科学基金(批准号:2009011015鄄1)资助.联系人简介:冯摇锋,男,博士,教授,主要从事化学生物传感技术及功能荧光试剂的制备研究.E鄄mail:feng鄄feng64@263郾net1178高等学校化学学报摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇Vol.33摇mmol/L甘氨酸鄄盐酸再生液均为PharmaciaBiosensorAB公司产品;N鄄羟基琥珀酰亚胺(NHS)和N鄄乙基鄄N鄄(二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)购于Si
8、gma公司;人转铁蛋白标准品购自美国Fitzgerald公司;鸡抗人转铁蛋白蛋黄抗体购自美国ICL实验室;人血清样品由大同大学附属医院提供;其它试剂均为分析纯,实验用水均为二次蒸馏水;所有溶液均用0郾22滋m(水系)微孔滤膜过滤,并在使用前进行超声脱气处理.1.2摇实验过程1.2.1摇鸡抗人转铁蛋白蛋黄抗体偶联条件的选择摇在室温(25益)下,分别用pH=3郾75,4郾0,4郾5,5郾0和5郾5的10mmol/L的醋酸钠缓冲溶液将鸡抗人转铁蛋白蛋黄抗体稀释到25滋g/mL,以10滋L
