药物对牛蛙淋巴细胞毒副作用的研究

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1、水产科技情报2010，37(5)243doi：10．3969／j．issn．1001—1994．2010．05．009药物对牛蛙淋巴细胞毒副作用的研究邓时铭肖克宇蒋国民(1湖南省水产科学研究所，长沙4101532湖南农业大学动物科技学院，长沙410128)摘要：将牛蛙T、B淋巴细胞悬液分别与1000、500和250g／mL环磷酰胺、庆大霉素和链霉素药液置于22℃和28℃下共同培养48h，显微镜下统计细胞死亡率和细胞毒，以探讨三种药物对牛蛙淋巴细胞的毒副作用。结果显示：同温度、不同浓度的环磷酰胺对牛蛙淋巴细胞的毒副作用差异不显著；相同浓度、不同温度条件下，环磷酰胺的毒副

2、作用差异极显著，该药对T淋巴细胞的毒副作用随着温度的升高显著增强，细胞死亡率显著上升，细胞毒增加，B淋巴细胞的死亡率和细胞毒则显著下降；庆大霉素对牛蛙T、B淋巴细胞的毒副作用随着使用浓度和温度的上升而增强，细胞死亡率上升，细胞毒增加；链霉素对T、B淋巴细胞的毒副作用随着温度的上升而增强，对B淋巴细胞的毒副作用尤为显著。关键词：环磷酰胺；庆大霉素；链霉素；牛蛙；淋巴细胞；毒副作用牛蛙(Ranacatesbeiana)是一种两栖类经济动要的理论意义和实用价值。物，营养价值高，能强壮体质，治疗多种疾病，1材料与方法其皮肤分泌物具有广泛而复杂的生理和药理活性J。随着养殖规模的

3、扩大，疾病的增多，养殖1．1试验材料者越来越依靠药物来进行牛蛙疾病的防治。但由牛蛙购于长沙市马王堆菜市场，体质健壮，雌于药物本身存在一定的毒副作用，加之不科学的雄兼有。环磷酰胺、庆大霉素、链霉素分别由上海使用导致药效降低，毒副作用增强，使牛蛙产品质华联制药有限公司、河南辅仁怀庆堂制药有限公量下降，甚至危害到人类健康，同时也严重制约了司、大连美罗大药厂生产，购白药店。养殖业的可持续发展。1．2淋巴细胞悬液的配置环磷酰胺、庆大霉素和链霉素是药物防治时从牛蛙心脏取血，以肝素抗凝，用淋巴细胞分常用的免疫制剂和抗炎类药物，对病原微生物有离液分离，取白细胞层，用RPMI1640细

4、胞培养液一定的抑制或杀伤作用，起到改善或缓解疾病状和5．00％小牛血清配制淋巴细胞悬液。态的作用J。然而在使用过程中，药物在达到1．3T、B淋巴细胞的分离药效的同时，是否对机体本身有一定的毒副作用?将淋巴细胞悬液放入尼龙棉柱内，封闭棉柱，笔者以牛蛙淋巴细胞为对象，研究在不同条件下置于37℃的水浴锅中孵育30rain。打开棉柱，倒药物对机体淋巴细胞的杀伤及毒性作用，探索药出培养液，并用RPMI1640细胞培养液洗涤两次，物对机体的免疫调节和毒副作用，为正确选择并收之为T淋巴细胞。将RPMI1640细胞培养液和科学合理使用药物提供一些参考。这一研究对保5．00％小牛血清的

5、混合液加入棉柱内，插入针栓障养蛙业和水产养殖业的持续发展也有着十分重用力挤压，可收集B淋巴细胞，调整细胞浓度为收稿日期：2010—04—20作者简介：邓时铭(1974一)，女，硕士研究生，主要从事水生动物病害与免疫方面的研究。通讯作者：肖克宇(1954一)男，教授，主要从事水产医学研究。水产科技情报2010，37(5)1X10个／mL备用。液进行ANAE染色，计算出T淋巴细胞纯度为1．4淋巴细胞活性检查与ANAE染色(89．00±1．23)％，B淋巴细胞纯度为(90．67±取少许T、B淋巴细胞悬液进行台盼蓝染色，1．68)％。光学显微镜下观察，计算T、B淋巴细胞的活性

6、。2．2药物对T、B淋巴细胞的毒性将分离的T、B淋巴细胞进行ANAE染色，计算T、将分离的T、B淋巴细胞分别与药物在不同B淋巴细胞的纯度。浓度和温度下进行细胞培养试验，T、B淋巴细胞1．5淋巴细胞的培养显示的毒性结果如表1。往96孔培养板内滴加0．40mI／孔的细胞悬22℃时，环磷酰胺对T、B淋巴细胞的致死率液，再往孔内滴加不同浓度的上述药物0．10mlM和细胞毒均低于50％；温度上升至28℃，T淋巴孔，从而使得药物的最终浓度分别为1000、500和细胞对环磷酰胺的敏感性提高，细胞死亡率上升，250mL。每个浓度做3个重复孔，同时设对细胞毒显著增强，均达90％以上，各

7、浓度组之间照孔(加生理盐水0．10mtl~L)。轻轻摇匀，置于的差异不明显，但同22℃下的相同浓度组比较，22、28℃培养箱中培养48h。差异均极显著，B淋巴细胞死亡率和细胞毒随着1．6计数温度的上升而有所下降。因此，相同温度、不同浓用台盼蓝染色，高倍镜下计数200个细胞中度的环磷酰胺对T或B淋巴细胞的细胞毒差异的蓝染细胞数，计算细胞的死亡率和细胞毒。不显著，不同温度、相同浓度的环磷酰胺对T或B细胞死亡率=每200个细胞中的死亡细胞淋巴细胞的细胞毒差异极显著，且T淋巴细胞毒数；极显著大于B淋巴细胞毒，表明环磷酰胺对T淋细胞毒=[(试验组死亡细胞数一对