新疆耐盐植物藜的甜菜碱醛脱氢酶基因（cabadh）的克隆、盐胁迫表达分析及植物表达载体的构建

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1、新疆农业科学2010，47(7)：1273—1279Xi~iangAgriculturalSciences新疆耐盐植物藜的甜菜碱醛脱氢酶基因(CaBADH)的克隆、盐胁迫表达分析及植物表达载体的构建袁军文，谷丽丽，陈莎莎，徐栋生，兰海燕(新疆大学生命科学与技术学院，新疆生物资源基因工程重点实验室，鸟鲁木齐830046)摘要：【目的】为开展植物耐盐基因工程提供候选基因。【方法】研究以新疆耐盐植物藜为材料，利用同源克隆技术从藜中克隆到BADH基因，并通过RT—PER方法对其在不同盐胁迫下的表达进行了初步分析，随后将该基因构建至高效植物表达载体pEN

2、2300上。【结果】(1)经测序分析并与藜科其他植物进行同源性比对显示，得到的序列为藜的BADH基因，开放阅读框长度为1503bp，编码500个氨基酸；(2)以BADH基因核心序列设计引物对此基因在盐胁迫下的表达进行了RT—RCR分析，发现其本底表达量较高，以100mmol／LNaC1处理2．5、12和24h后其表达量没有明显增加趋势，而以50mmo~LNaC1或KC1长期胁迫后其表达量则比对照和100mmol／L时的表达量高；(3)经双酶切鉴定，已成功将CaBADH基因构建到植物表达载体pCN2300，得到重组质粒pCN2300一CaBADH

3、。【结论】研究为进一步从生理和分子水平阐明藜的耐盐机制提供了一定参考。并为通过转基因技术获得耐盐作物新品种打下基础。关键词：藜；甜菜碱醛脱氢酶基因；盐胁迫；表达分析；表达载体构建中图分类号：S188文献标识码：A文章编号：1001—4330(2010)07—1273—07CloningofBetaineAldehydeDehydrogenaseGene(CD日)fromChenopodiumalbumL．andExpressionAnalysisofSaltStressandConstructionofPlantExpressionVector

4、YUANJun—wen，GULi—li，CHENSha—sha，XUDong—sheng，LANHai—yan(Xinji~ngKeyLaboratoryofBiologicalResourcesandGeneticEngineering，CollegeofLifeScienceandTechnology，XinjiangUniversity，Urumqi830046，China)Abstract：【Objective】Toprovidecandidategenesforplantgeneticengineeringinimprovingsal

5、ttolerance，【Method】inpresentstudy，ChenopodiumalbumL．，asalt—tolerantspeciesdistributedinXinjiangwasusedasmaterial，BADHgenewasclonedthroughhomologycloningtechnique，andapreliminaryanalysiswasperformedforexpressionofBADHunderdifferentsaltstressesbyRT—PCR，thenaplantexpressionvect

6、orpCN2300一CaBADHwasconstructed．【Result】Resultsshowedthat：(1)AfterbeingsequencedandmultiplealignmentwithotherseveralChenopodiaceaespecies，itindicatedthatCaBADHwassuccessfullycloned。anditsnucleotidesequenceWas1503bp。500aminoaciddeducedbycode；(2)RT—PCRanalysiswithprimersofBADHg

7、enecoresequenceundersaltstressshowedthatCaBADHexhibitrelativelyhighbasallevelinChenopodiumalbum。andtherewasnosignificantincreaseoftranscriptlevelafter2，5，12。24hstressunder100mmol／L1NaC1：However。ahigherexpressionlevelwasobservedunder60dstressof50mmol／LNaC1orKC1treatment，rathe

8、rthanthatof100mmol／LNaC1orKCIcomparedwiththecontro1．(3)Bydoubledigestionver