微卫星标记对红鳍东方鲀繁殖的指导应用及遗传分析

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1、第29卷第9期球产科学Vol_29NO．92010年9月FISHERIESSCIENCESep．2010微卫星标记对红鳍东方纯繁殖的指导应用及遗传分析谷晶晶，朱迎军，孟雪松。，孙效文(1．大连水产学院生命科学与技术学院，辽宁大连116023；2．中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，农业部北方鱼类基因工程育种实验室，黑龙江哈尔滨150070；3．大连天正实业有限公司，辽宁大连116021)摘要：利用已有设计的2O个具有多态性的微卫星标记对16尾红鳍东方纯亲鱼(10尾舍，6尾旱)的有效等位基因数、观望杂合度、期望杂合度、多态信息含量、遗传相似性

2、系数、遗传距离等进行了检测。据此设计了lO对亲鱼配组，获得1O个子代家系。其中母本中16和8号的平均有效等位基因数和平均期望杂合度较其他亲本高，将其分别与3个父本配组，其他则参照遗传距离进行配组。于次年，对F1O个家系的体质量、体长均值进行了比对，发现16旱与11舍配组得到的子代体质量、体长均值为最大。8旱和i0舍配组得到的子代体质量、体长均值最小。结果表明，红鳍东方纯子代杂种优势与亲本个体差异有关。关键词：红鳍东方纯；繁殖配组；遗传距离；微卫星中图分类号：Q786文献标识码：A文章编号：1003—1111(2O10】O9—0527-05红

3、鳍东方鲍(Fugurubripes)肉质细腻，味道鲜提基因组DNA并纯化，具体步骤参考《分子克隆实美，深受日本消费者喜爱，其体内的有毒部位还可验指南》L6]。提取名贵的河纯毒素，有较高的经济价值。1．1．2微卫星引物选择与扩增微卫星标记(SSR)技术，由于其方便快速，稳本实验室的引物设计由郝君L1完成，微卫星引定性高，多态性强，遵循孟德尔遗传定律和共显性物的序列及退火温度见表1。引物由上海生工生物遗传的特点，被广泛应用于基因作图、群体遗传变工程服务有限公司合成。异、亲代评估和物种进化等研究领域，是用于研究PCR扩增反应总体积为251，其中P

4、CR反应种内及种间遗传多样性水平的较好遗传标记。缓冲液18l(0．25mmol／L，pH8．3的Tris—C1，有关红鳍东方纯微卫星标记方面的报道有很1．25mmol／LKCI，0．0375mmol／LMgC12，2．5×多。]。刘秀云等。利用微卫星对红鳍东方纯杂种10一Gelatin，2．5×10一Tween，2．5×1ONP一40，优势进行了预测。笔者利用20个微卫星标记对160．005mmol／LdNTP)；基因组DNA约5Ong，微尾红鳍东方纯亲鱼的遗传多样性进行分析，统计分卫星引物1l(上游、下游引物浓度均为10gmol／析了遗传

5、距离等数据，设计了红鳍东方纯雌雄亲鱼L)，Taq聚合酶1U，无菌超纯水补足总体积至25一对一的配组繁殖，对子代的生长情况与亲鱼间的l。琼脂糖PCR反应程序：预变性94℃，3min；遗传距离做了相关分析。PCR循环程序为变性94℃，30S；复性48～57℃，30S；延伸72℃，30S；28个循环，72℃延伸5min。1材料与方法扩增反应所用DNA扩增仪为美国Thermo公1．1材料司的P×2ThermalCycler型PCR扩增仪和ABI1．1．1试验用鱼及DNA的提取公司的PE9800PCR扩增仪，电泳仪为Pharmccia试验用红鳍东方鲍

6、分别来自河北南盐县(10、9Biotech公司的PowerPacHVPowerSupply型号舍；8号、1号旱)，河北萧海东(3、14号舍；16、15电泳仪，扫描仪为EPSON2480photo，纯水仪为号旱)；辽宁庄河(7、2、6、4、12号舍；5号旱)；丹东Sartoriousarium611型纯水生产设备。东港(11号舍、13号旱)。取新鲜尾鳍，酚氯仿法抽收稿日期：2009—02—04；修回日期：2009一10—09．基金项目：国家重大基础研究项目(2004CB117405)．作者简介：谷晶晶(1983一)，女，硕士研究生，研究方向：

7、水产养殖学；E-mail：gJJ一83@163．corn．通讯作者：孙效文(1955一)，男，研究员，博士生导师，研究方向：水产动物遗传育种；E-mail；sunxw2002@163．COrn．水产科学第29卷1．1．3微卫星等位基因的检测1．1．4数据的统计与分析方法采用8％非变性聚丙烯凝胶电泳检测，140V利用相关群体遗传学分析软件Popgene1．32电泳3h，银染，EPS0N扫描仪扫描并记录电泳结来计算和统计分析。计算16尾红鳍东方鲍亲鱼在果。Gel—ProAnalyzer4．5软件分析等位基因谱2O个微卫星基因座上的平均等位基因数

8、、平均有效带。等位基因数、平均观测杂合度、平均期望杂合度及遗传距离。表1引物序列及退火温度2．2亲鱼遗传结构分析2结果2．2．1等位基因数和遗传杂合度2．1每尾红鳍东方纯的平均观