原发性胆汁性肝硬化患者外周血nkt细胞体外活化及相关细胞因子表达分析

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1、2010年8月第33卷第8期ChinJLabMed，August2010，Vo1．33，No．8·735·酶联免疫斑点技术临床应用．原发性胆汁性肝硬化患者外周血NKT细胞体外活化及相关细胞因子表达分析陈凤英刘晓丽蔡军【摘要】目的分析与评价PBC患者外周血TCRVoL24Vp11NKT数量和功能状态及其与PBC发生的关系。方法制备60例PBC患者(PBC组)和60名年龄及性别匹配健康人(健康对照组)PBMC，以FACS检测TCRVoL24VB11NKT数量；以0【半乳糖酰基鞘胺醇(一galeer)

2、和IL-2诱导PB／~IC中NKT的扩增活化，用ICS-FC检测细胞内表达IL4和IFN-的NKT比值；用ELISpot和ELISA定量检测细胞内及上清液IL-4和IFN-的表达量。结果FACS检测PBC组和健康对照组TCRVc~24V611NKT扩增前后的比率分别为[0．16(0．11～0．26)]％、[0．82(0．61—0．89)]％、[0．33(0．27—0．38)]％、[27．40(23．52～33．87)]％，前组显著低于后组(z值分别为6．563、7．707，P<均0．O1)。扩增

3、活化后PBC组和健康对照组TCRVoL24VB11NKT的扩增倍数分别为扩增活化前的[96．05(8O．50～100．27)]倍和[134．65(121．60～142．13)]倍，PBC组明显低于健康对照组(Z=6．462，P<0．O1)。同时于活化后用ICS-FC检测细胞内细胞因子，PBC组和健康对照组IFN一与TCRVa24VBl1NKT比分别为[38．98(36．73—42．98)]％、[34．56(30．12—36．78)]％，前组显著高于后组(Z=3．158，P<0．05)；PBC组和

4、健康对照组IL-4与TCRVe24VBl1NKT细胞比分别为[0．193(0．179—0．218)]％和[34．36(30．93～38．77)]％，前组显著低于后组(Z=6．476，P<0．01)。ELISpot和ELISA定量检测扩增活化后PBC组分泌IFN一的斑点形成细胞数(SFC)和上清液IFN一^y分泌量分别为[410(380～500)]SFC／1×10。PBMC、(67．21±11．27)ng／L，健康对照组[340(280～39O)]SFC／1x10。PBMC、(31．45±8．17

5、)ng／L，前组的IFN—斑点形成细胞数及分泌量显著高于后组(Z=4．312，P<0．05、t=27．25，P<0．01)；PBC组的IL4斑点形成细胞数和分泌量分别为E73(60～loo)]SFC／1×10。PBMC、(12．65±4．17)吕／L，健康对照组[245(230—280)]SFC／1X10。PBMC、(28．31±6．31)g／L，PBC组IL-4却显著低于健康对照组(Z=5．112，P<0．01、t=25．34，P<0．01)。结论PBC组外周血TCRVoO．4VB11NKT数

6、量较健康对照组明显减少，经．galcer及IL一2体外活化后扩增倍数及分泌细胞因子IL4的功能较健康对照组显著降低，而分泌IFN一能力却显著高于健康对照组，NKT数量的减少及免疫调节功能的紊乱可能是PBC发病的重要因素之一。【关键词】肝硬化，胆汁性；细胞因子类；杀伤细胞，天然AnalysisofNKTeeHsandrelatedeytokknesinperipheralbloodofthepatientsthprimarybfi~ryckn-hosisCHENng一}ring，HU舡∞一IA，c

7、A，几D印0ofClinicalLaboratory，tter~nProvincialPeop~5Hospital，ZhengZhou450003，ChinaCorrespondingauthor：IAuXiao—IA。Ixl~s@l2&comDOI：10．3760／cm~j．issn．1009-9158．2010．08．006作者单位：450003郑州，河南省人民医院检验科通信作者：刘晓丽，电子信箱：lxlzts@126．COrn736中华检验医学杂志2010年8月第33卷第8期ChinJhb

8、Med．August2010．Vo1．33．No．8【Abstract】0bjecfiveToanalyzeandevaluatethechangesofquantityandfunctionofTcRV24vl31lNKTinPBMCofthepatientswithPBCanditsrelationshipwiththeoccurrenceofPBC．MethotisFlowcytometrywasutilizedtocountTCRV0L24VB11NKTceHsinPBMCin60cas