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《地高辛随机引物法标记探针的southern杂交技术优化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国农业科技导报,2009,11(4):123-128JournalofAgriculturalScienceandTechnology地高辛随机引物法标记探针的Southern杂交技术优化1,21121周长发,张锐,张晓,罗淑萍,郭三堆(1.中国农业科学院生物技术研究所,农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程,北京100081;2.新疆农业大学农学院,乌鲁木齐830052)摘要:为检测转基因抗虫棉中的BtCry1A基因的表达,采用地高辛随机引物法标记探针、化学发光检测的Southern杂交技术,通过纯
2、化探针、使用最适探针浓度、优化真空转印、杂交及免疫检测方法等一系列优化过程,最终得到背景低、信号强的Southern杂交结果。关键词:地高辛;化学发光法检测;转基因作物中图分类号:Q781文献标识码:A文章编号:100820864(2009)0420123206TechnologicalImprovementofSouthernBlotUsingDigoxigenin2labeledProbeswithRandom2primedMethod1,21221ZHOUZhang2fa,ZHANGRui,ZHAN
3、GXiao,LUOShu2ping,GUOSan2dui(1.BiotechnologyResearchInstitute,NationalKeyFacilityofCropGeneResourcesandGeneticImprovement,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100081;2.XinjiangAgriculturalUniversity,CollegeofAgriculture,Urumqi830052,China)Abstract:
4、Southernblotusingdigoxigenin(DIG)2labeledprobeswithrandom2primedmethodandchemiluminescentdetectionwasusedtodetectBtCry1Ageneoftransgenicinsect2resistantcotton.AserialofprocedurewasmodifiedbypurifyingtheDIG2labeledprobes,usingoptimumprobesconcentration,imp
5、rovingtheprocessofvacuumtransferring,hybridizationandimmunoassay.Finally,weachievedgoodSouthernblotresultwithlowbackgroundandhighsensi2tivity.Keywords:digoxigenin;chemiluminescentdetection;transgenicplant[4,5][6,7][8]Southern杂交是分析基因结构或检测DNA用在转基因植物、动物及分子标记
6、等研中是否含有特定序列的有效技术之一,1975年由究方面。[1]SouthernEM首创,取其姓氏而命名。该方法因为外源基因在转基因植物基因组中的排布是对转基因植株进行分子生物学鉴定的经典方形式和载体骨架的整合方式与外源基因的遗传稳法,可在DNA水平上检测外源基因是否转入并整定性和生物安全性密切相关,而Southern杂交能合到植物染色体上。Southern杂交中探针有同位够分析T2DNA和载体骨架的不同区段在转基因素标记或非同位素标记,其中非同位素标记系统生物基因组中的整合与排列方式,以及多拷贝外主要有
7、地高辛标记系统和生物素标记系统。地高源基因在转基因生物基因组的整合及遗传行[9]辛标记系统与生物素标记系统相比,地高辛一般为,所以我国从转基因生物的安全出发,要求不存在生物体中,因而消除了内源性背景。随着转基因生物安全性评价报告中要包括外源基因的化学发光底物的运用与不断的改进,地高辛标记Southern杂交结果。但Southern杂交步骤繁琐,系统灵敏度不断增强,甚至超过放射性同位素标许多适宜国内实验室的细节、注意事项并未在地[2,3]记系统,因而大多数实验室已将此项技术运高辛标记探针的Southern杂
8、交试剂盒说明书中详收稿日期:2009204229;修回日期:2009206230基金项目:国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2008ZX080052004)资助。作者简介:周长发,硕士研究生,主要研究方向为植物基因工程。E2mail:zhou.chang.fa@163.com。通讯作者:郭三堆,研究员,主要从事棉花基因工程研究。E2mail:gsdui@mail.caas.net.cn124中国农业科技导报11卷细阐述,致
