脂多糖和热打击联合作用对人肠上皮细胞细胞骨架的影响

《脂多糖和热打击联合作用对人肠上皮细胞细胞骨架的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、·2346·广东医学2010年9月第31卷第18期GuangdongMedicalJournalSep．2010。Vo1．31。No．18脂多糖和热打击联合作用对人肠上皮细胞细胞骨架的影响术刘志锋，曾平，刘亚伟，唐柚青，童华生，苏磊。^广州军区广州总医院ICU(广州510010)；广东省医学科学院、广东省老年医学研究所心内科(广州510080)；南方医科大学省部共建功能蛋白质组学重点实验室(广州510515)【摘要】目的观察脂多糖(LPS)与热打击单独和联合作用对人肠上皮细胞细胞骨架的影响。方法培养人肠上皮细胞株(SW480)，实验分组为：对照组，热打击组(又

2、分为热打击l、3、6h组)，LPS刺激组，热打击和LPS联合刺激组，用骨架蛋白(肌动蛋白F—actin)的特异性染料罗丹明标记的F—actin特异性结合物鬼笔环肽(rhodamine—phalloidin)和细胞核特异性染色剂(DAPI)行免疫荧光，检测在上述刺激作用下细胞形态的改变和F—actin在细胞内分布的变化。结果相比于对照组，热打击lh就可以使细胞轮廓变圆，细胞伪足变短变粗，细胞间间隙变大。热打击3h时上述情况更加明显，而热打击6h时，细胞几乎全部坏死漂浮。单独LPs作用6h时也能看到多数细胞出现伪足变短变粗，细胞间间隙增大情况，但较单独热打击1h组

3、程度轻。而热打击和LPs联合作用则可看到二者间存在一定的协同作用。正常对照组细胞的F—actin呈相对均匀分布，但以细胞周边和核的周围居多，而单独LPS作用即可看到细胞骨架发生重组，出现应力纤维，而和热打击联合作用时，细胞周边的F—actin明显减少，出现明显的应力纤维(变粗、变短、紊乱，排列呈明显的非极性单向分布)。结论热打击和LPS单独作用均可使细胞形态发生明显改变，细胞骨架发生重组，细胞间间隙增大，并且二者之间存在一定的协同效应，这为理解重症中暑至多脏器功能衰竭(MODS)发生发展过程中，肠屏障细胞的通透性增加进而引发肠道细菌和内毒素移位的作用机制提供了

4、直观的实验依据。【关键词】脂多糖；热打击；细胞骨架；肠上皮细胞；重症中暑近年来的研究表明，肠道作为体内最大的“储菌ning公司；罗丹明一鬼笔环肽(rhodamine—rhalloidin)库”和“内毒素库”，以其在体内独特的生理环境参与和细胞核特异性染色剂(DAPI)均购自Molecular全身炎症反应综合征(systemicinflammatoryresponseProbes公司；人肠上皮细胞株(SW480)由南方医院消syndrome，SIRS)和多器官功能障碍综合征(muhipteor—化科馈赠；荧光显微镜：德国Leica公司。gandysfunctio

5、nsyndrome，MODS)的病理生理过程。此1．2方法外，更多最新的研究倾向于，中暑的病理生理学反应不1．2．1细胞复苏培养和实验分组人肠上皮细胞株但可由热暴露的lI接损伤引起，而且还可继发于热损(SW480)复苏后，将细胞收入离心管中，1000r／min离伤之后的SIRS，进而引发MODS。但在此过程中，在心10min，弃上层清液，用含20％FBS的RPMI1640培分子水平的肠道细胞，尤其是作为肠黏膜机械屏障重养液混匀细胞，凋整细胞浓度至(100～150)x10／cm，要组成部分的肠上皮细胞在热打击和肠道细菌以及由种人培养皿中，在37℃、5％CO条件下

6、培养。次13换细菌产生的内毒素共同作用下经历了怎样的分子变液，以后根据细胞生长情况每2～3天换液1次。化，一直没有切实可靠的实验依据。基于此，我们模拟实验前1天，将3×10个细胞铺入Petri小皿中，中暑情况下肠上皮细胞所处的病理环境，研究了脂多培养24h待细胞融合至约70％后，培养液更换为无血糖(1ipopolysaccharide，LPS)与热打击作用对人肠上皮清培养基，培养6h后按下述方法进行刺激，每种刺激细胞细胞骨架改变的影响，以期为明确肠屏障细胞的做3个平行皿，每个独立实验重复3次。对照组(将细骨架形态改变在肠道细菌和内毒素移位中的作用机制胞置于标准

7、37~C、5％CO培养箱中同其余各组等时间提供一定的实验依据和理论基础。培养)，热打击组(又分为热打击1、3、6h组，即将细胞置于43~C细胞孵箱中分别培养1、3、6h)，LPS刺激组1材料与方法(1g／mLLPS刺激6h)，热打击和LPS联合刺激组(先1．1材料RPMI1640培养基购自美国GibcoBRL公将细胞置于43℃细胞孵箱中作用lh后再用1oe／mL司；胎牛血清(fetalbovineserum，FBS)购白美国Hy—LPS刺激6h)。Clone公司；LPS(EscherichiacoliO1l：B4)购自美国1．2．2肌动蛋白丝F—actin和细

8、胞核的免疫荧光检Sigma公司；96孔