临床医学毕业论文白藜芦醇诱导大鼠原代脂肪细胞凋亡及机制.doc

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1、XX大学毕业论文白藜芦醇诱导大鼠原代脂肪细胞凋亡及机制2014年6月25日白藜芦醇诱导大鼠原代脂肪细胞凋亡及机制作者：陈思凡，周妮曼，郑琳，柯梁汝，单智铭，冯翔【摘要】【口的】探讨白藜芦醇(Res)对大鼠原代脂肪细胞凋亡的影响及其机制。【方法】培养大鼠原代脂肪细胞，添加不同剂量的Res干预，用Hoechst33258染色，在荧光显微镜下观察细胞核形态;用DNALadder实验观察DNA断裂的条带;检测各组培养基和细胞内的乳酸脱氢酶(LDH)含量，计算LDH漏出率;用流式细胞仪测定细胞凋亡率;Westernblot检测相关位点，包括沉默信息调节因子l(Sirtl)、细胞色

2、素C(CytochromeC)、半胱天冬氨酸酶家族(Caspase9和Caspase3)的蛋白质表达。【结果】经过Res干预后，细胞核染色质高度凝集，电泳后出现180〜200bp整数倍的寡核昔酸片段。细胞LDH漏出率升高，呈剂量■反应关系(P0.05或P0.01)oRes作用后细胞凋亡率明显上升，呈剂量■反应关系(P0.01)oSirtl>CytochromeC、活化的Caspase9及Caspase3表达水平上升，胞浆CytochromeC释放也增加。【结论】Res促进原代脂肪细胞凋亡，其机制可能是通过增加Sirtl表达，经由线粒体凋亡途径，作用于Caspase9和C

3、aspase3。【关键词】白藜芦醇；凋亡；沉默信息调节因子1;细胞色素C;半胱天冬氨酸酶Abstract：[Objective)Toexploretheeffectandmechanismofresveratrol(Res)onapoptosisofratprimaryadipocytes.[Methods]Ratprimaryadipocyteswereculturedandtreatedwithresveratrolindifferentdosages.AdipocyteswerestainedbyHoechst33258,andcellmorphologicalt

4、ransformationwasexaminedwithfluorescentmicroscope.DNALadderassaywasusedtofurtherconfirmcellapoptosis.TheLDHcontentinmediumandcellswasmeasuredtocalculatetheLDHleakingratio.Thenumberofapoptoticcellswereassayedwithflowcytometry.Theexpressionofsilentinformationregulator1(Sirtl),CytochromeC,C

5、leavedCaspase9,CleavedCaspase3wereexaminedusingWesternblot.[Results】Resinducedtheapoptosisofratprimaryadipocytesinadosedependentmanne匸NuclearfragmentationandcondensationwereobservedbyHoechst33258stainingandDNALadderassay.ResalsoincreasedtheLDHleakingratio,thenumberofapoptoticcellsandthee

6、xpressionlevelsofSirtlandCytochromeC,CleavedCaspase9,CleavedCaspase3・【Conclusion】Rescouldinducetheapoptosisofratprimaryadipocytes.TheunderlyingmechanismsmaybeenhancingexpressionofSirtl,CytochromeC,CleavedCaspase9andCleavedCaspase3whicharerelatedtocellapoptosis.既往研究认为，肥胖的形成与脂肪的合成或分解代谢紊乱密切

7、相关，而新的研究显示，前脂肪细胞或脂肪细胞的凋亡，对于减少机体过度的脂肪堆积，改善朕岛素抵抗状态及预防与治疗代谢综合征都具有实际意义［1］。白藜芦醇(Resveratrol,Res)是一种多酚类化合物，存在于多种天然植物如葡萄、虎杖中,在新鲜葡萄皮屮含量最高。Res有广泛的生物学功能，在机体屮有包括抗癌、抗炎症、保护心血管系统、清除口由基、改善胰岛素抵抗和抑制血小板凝集等作用。研究发现，Res可以抑制多利噓细胞的增殖，并且促进其凋仁具有肿瘤化学预防的作用［2］。然而，F1前有关Res对脂肪细胞凋亡作用的研究仍相对较少。沉默信息调节因子1(