质粒图谱信息.doc

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1、质粒图谱信息一.九种表达载体Pllp-OmpA,pllp-STII,pMBP-P,pMBP-C,  pET-GST,pET-Trx,pET-His,pET-CKS,pET-DsbA二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisA  pTrxFus  pRSET-A  pRSET-B  pVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS(+)L4440  pCAMBIA-1301  pMAL-p2X  pGD926三.PET系列表

2、达载体ProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETDsbFusionSystems39band40bProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETExpressionSystem33bProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETExpressionSystemsProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETExpressionSyste

3、msplusCompetentCellsProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETGSTFusionSystems41and42ProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETNusAFusionSystems43.1and44ProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETVectorDNAProteinPurification»PurificationSystems»Stre

4、p•TactinResinsandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoRlpGEX-1I/BAP  pGEX-2T pGEX-2TK  pGEX-3X  pGEX-4T-1  pGEX-4T-2  pGEX-4T-3  pGEX-5X-1  pGEX-5X-2  pGEX-5X-3  pGEX-6P-1  pGEX-6P-2  pGEX-6P-3  五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1

5、(+)pPICZalphaA  pGAPZαA  PYES2.0pBI121pEGFP-N1   pEGFP-C1pPIC9K  pPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种非病毒转基因载体。一、质粒的组成要素  复制起始位点Ori:即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。  抗生素抗性基因:可以便于加以检测，如Amp+,Kan+  多克隆位点MCS:克隆携带外源基因片段  P/E:启动子/增强

6、子  Terms:终止信号l  加poly（A）信号:可以起到稳定mRNA作用二、如何阅读质粒图谱第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。（1）Ampr水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。（2）tetr可以阻止四环素进入细胞。（3）camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。（4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（长那霉素衍生物）失活（5）hygr使潮霉素β失活。第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多

7、个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳

8、。    启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。l    增强子/沉默子－为真核l基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。    核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs