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时间:2020-04-02
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1、质粒图谱信息一.九种表达载体Pllp-OmpA,pllp-STII,pMBP-P,pMBP-C, pET-GST,pET-Trx,pET-His,pET-CKS,pET-DsbA二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisA pTrxFus pRSET-A pRSET-B pVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS(+)L4440 pCAMBIA-1301 pMAL-p2X pGD926三.PET系列表
2、达载体ProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETDsbFusionSystems39band40bProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETExpressionSystem33bProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETExpressionSystemsProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETExpressionSyste
3、msplusCompetentCellsProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETGSTFusionSystems41and42ProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETNusAFusionSystems43.1and44ProteinExpression»ProkaryoticExpression»pETVectorDNAProteinPurification»PurificationSystems»Stre
4、p•TactinResinsandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoRlpGEX-1I/BAP pGEX-2T pGEX-2TK pGEX-3X pGEX-4T-1 pGEX-4T-2 pGEX-4T-3 pGEX-5X-1 pGEX-5X-2 pGEX-5X-3 pGEX-6P-1 pGEX-6P-2 pGEX-6P-3 五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1
5、(+)pPICZalphaA pGAPZαA PYES2.0pBI121pEGFP-N1 pEGFP-C1pPIC9K pPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种非病毒转基因载体。一、质粒的组成要素 复制起始位点Ori:即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因:可以便于加以检测,如Amp+,Kan+ 多克隆位点MCS:克隆携带外源基因片段 P/E:启动子/增强
6、子 Terms:终止信号l 加poly(A)信号:可以起到稳定mRNA作用二、如何阅读质粒图谱第一步:首先看Ori的位置,了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒)第二步:再看筛选标记,如抗性,决定使用什么筛选标记。(1)Ampr水解β-内酰胺环,解除氨苄的毒性。(2)tetr可以阻止四环素进入细胞。(3)camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物,使之失去毒性。(4)neor(kanr)氨基糖苷磷酸转移酶使G418(长那霉素衍生物)失活(5)hygr使潮霉素β失活。第三步:看多克隆位点(MCS)。它具有多
7、个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入,会导致某种标志基因的失活,而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。第四步:再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说,外源DNA片段越长,越难插入,越不稳定,转化效率越低。第五步:是否含有表达系统元件,即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体,还是要以实验目的为准绳
8、。 启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号启动子-促进DNA转录的DNA顺序,这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游,是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位,但启动子本身不被转录。l 增强子/沉默子-为真核l基因组(包括真核病毒基因组)中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子-负增强子,负调控序列。 核糖体结合位点/起始密码/SD序列(Rbs
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