张力敏感性阳离子通道在机械牵张引起气道黏液高分泌中的作用

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1、·2328·医堂盘查!生!旦!旦笠!鲞筮塑翅t1MedJChina，September7，2010．VoJ．90．Nn33．临床研究张力敏感性阳离子通道在机械牵张引起气道黏液高分泌中的作用钟甜尤列·皮尔曼维克多·科罗索夫周向东【摘要】目的观察张力敏感性阳离子通道、c内流和豆蔻酰化富丙氨酸c激酶底物(MARCKS)在机械牵张引起气道黏液高分泌中的作用。方法人气道黏膜上皮细胞(HBEI6)体外培养，采用小型生物撞击机给予机械牵张刺激，各组培养细胞依施加条件不同而分为对照、牵张、牵张+钆、牵张+硝苯吡啶、牵

2、张+低分子量肝素、牵张+MARCKS效应结构域(ED)锁核酸(LNA)以及牵张+MARCKS的ED无关对照LNA序列共7组，分别采用逆转录聚合酶链反应(RT．PCR)和免疫荧光法观察与胞吐相关的突触相关膜蛋白SNAP23以及黏蛋白(MUC)5ACmRNA和蛋白表达，酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞培养上清中MUC5AC分泌。结果机械牵张能显著升高人气道黏膜上皮细胞中SNAP23和MUC5AC表达，显著提升细胞培养上清中MUC5AC分泌(P<0．05)；钆、硝苯吡啶、MARCKS的ED—LNA

3、均能抑制机械牵张对SNAP23表达和MUC5AC表达、分泌的提升作用(均P<0．05)；而低分子量肝素未能显著降低SNAP23表达和MUC5AC表达、分泌(P>0．05)。结论机械牵张能升高人气道黏膜上皮细胞MUC5AC的表达，其机制可能与张力敏感性阳离子通道、ca“内流和MARCKS途径有关。【关键词】机械牵张；张力敏感性阳离子通道；胞吐；黏蛋白TheefectsofstretchsensitivepositiveionchannelonthehighexternalizationofMUC5ACi

4、nairwayepithefialceHsbymechanicalstretchingZHONGTian‘，Ju王M．perelman，Victorp．Kolosov，ZHOUXiang—dong．DepartmentofRespiratoryMedicine，SecondAffiliatedHospitd，ChongqingUniversityofMedicalScience．Chongqing400010．inaCorrespondingauthorZHoUXiang-dongEmail：蕊d99

5、9@263．net【AbstractlobjectiveTheefectsofstretchsensitivepositiveionchannel，山einternalflowofCa“andmyristoylatedalanine—richCkinasesubstrate(MARCKS)ontl1ehighexternalizationofMUC5ACinairwayepithelialcellsinmechanicalstretching．MethodsMini—typeMuhi-fuctiona

6、lBio—impactMachinwasusedtoconstructthemodelofmechanicalstretching．Theairwayepithelialcellsweredivideintocontrolgroup，stretch，stretchandgadolinium，stretchandlowmolecularweightheparin，stretchandnifedipine，stretchandthelockednucleicacidsofMARCKSeffectivedo

7、main(ED)，stretchandthecontrollockednucleicacidsofMARCKSEDgroups．TheexpressionofMUC5ACandSNAP23proteinincellsweredeterminedbyimmunohistochemistrymethod．contentsofMUC5ACandSNAP23proteinweremeasuredbyImageProPlus5．0．MUC5ACproteininsupernatantwasdeterminedb

8、yELISAmethods．SNA1：'23mRNAwasdeterminedbyRT．PCRmethods．ResultsMechanicalstretchingcouldincreasetheexpressionofSNAP23andMUC5ACincellsandMUC5ACinsupernatant(P<0．05)．Gadolinium，nifedipineandLNAofMARCKSEDcouldreducetheincreasetheexpr