大豆蛋白中硒分布的研究.pdf

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1、文章编号：1008-842（32001）01-0010-03大豆蛋白中硒分布的研究彭振坤，周大寨，周毅峰（湖北民族学院园艺系，湖北恩施，445000）摘要：用分级盐析法将高硒土壤上栽培的大豆蛋白质分为A、B、C、D、E五组，进而测定了各组中蛋白质的分布及其硒含量，结果表明大豆吸收的硒主要贮存结合于蛋白质中。关键词：大豆；硒；硒蛋白；分级盐析；透析；峰高中图分类号：@513文献标识码：A大豆，又称黄豆，属豆科，蝶形花亚科，大豆属，是广泛栽培的一年生旱粮作物。大豆种子富含脂肪和蛋白质，是食用油和蛋白质的良好原料，栽

2、培和利用的历史悠久。硒具有多重生物学功能，是人和动物必需的微量营养元素。已经证实40多种疾患与缺硒有关［1］。食物链是人体摄入硒的主要途径［2］。植物能吸收利用环境中的硒，高硒土壤上栽培的大豆具有一定程度对硒的生物富集能力，其硒含量可达11［3］，是良好!g/g的蛋白质和硒营养源。对于硒在大豆的分布和赋存状态至今缺少相关报道，为此本文对栽培于高硒土壤上的大豆中硒的含量与分布进行了研究。1材料与方法1.1试剂与材料1.1.1原料及来源大豆：大豆种子采自恩施市双河镇渔塘坝村土壤点；水：本实验所用水全是去离子水。1.

3、1.2主要试剂及仪器试剂：硝酸（优级纯）；牛血清蛋白（电泳单点纯）；磷酸二氢钾；磷酸氢二钠；硫酸铵；氯化钡；高氯酸；碘酸钾；硒粉；氨水；丙酮；考马斯亮兰G-250；pH=10的NH3-NH4Cl溶液；pH=8.5（1/15mol/l）的磷酸缓冲液（BPS）（各试剂均为分析纯）。仪器：双重石英蒸馏水器；磁力搅拌器；722分光光度计；LXJ-"B低速大容量多管离心机；JP-4000极普分析仪。1.2试验方法1.2.1蛋白质分离将大豆烘干、粉碎、过筛、脱脂，BPS溶液提取硒蛋白，经分级盐析沉淀、离心、透析。1.2.2

4、蛋白质含量分析方法以牛血清蛋白质为标准蛋白质，考马斯亮兰G-250为染色剂，采用比色法测其含量。1.2.3硒含量分析方法以硒粉为标准硒，采用Se-KIO体系催化极普法测定大豆蛋白质中硒含量［4-5］。32试验过程2.1试验步骤2.1.1原料处理将大豆在80C下烘干，粉碎过40目筛。称取5.0000g大豆粉，加入30ml丙酮，搅拌2h脱脂，静置，倾去收稿日期：20000921基金项目：湖北省教育厅重大项目（99Z-006）作者简介：彭振坤（1946-），男（土家族），湖北恩施人，教授，主要从事植物遗传研究.湖北民

5、族学院学报（自然科学版）第19卷丙酮，并用丙酮清洗3次，热风吹干，得脱脂大豆粉。2.1.2粗蛋白提取脱脂粉中加入45mlBPS溶液，搅拌提取21，5000I/min离心15min.取上清液，残渣中加入25mlBPS溶液，搅拌提取11，离心，合并两次上清液，得粗蛋白质提取液。2.1.3蛋白质分级盐析及透析测量提取液的体积，向提取液中加入硫酸铵至不同饱和度，盐析、沉淀、得各组蛋白质，将各组蛋白质沉淀用最少量的BPS溶液溶解，用去离子水透析。2.2蛋白质及硒含量的测定2.2.1蛋白质含量测定准确移取一定稀释倍数的蛋白

6、质溶液0.50ml于刻度试管中，加入0.50mlBPS溶液和5ml考马斯亮兰G-250溶液，摇匀后放静置2min，于722型分光光度计595nm处测定其吸光度值。BPS溶液代替样品液为空白参比，根据标准曲线的回归方程计算各样品的蛋白质含量。2.2.2各组蛋白质硒含量的测定分别移取25.00ml蛋白质溶液于消化烧瓶中，加入10.00ml混酸（VHNO1VHCLO=511），在160-180C消34化，将硒转化成电活性的!价态硒［4］，测定硒的含量。利用标准曲线的回归方程计算出样品硒的含量。2.2.3大豆粉中总硒含

7、量的测定准确称取1.0000g，测定步骤与蛋白质中硒测定步骤相同。3实验结果及讨论（1）由表1和图1可看出硫酸铵分级盐析所得各组蛋白质的含量不同，D组最多，B组次之，A组最少，D组是A组的14倍。（2）由表2和图2可知，D组蛋白质含硒量最高，其次是C、B、E三组，A组未检出硒，由图2可看出，B组的蛋白质含量高于C组的蛋白质含量，硒含量低于C组。这表明：大豆蛋白质中并不是每一种蛋白质都含有硒，含硒蛋白质中硒含量也不相同，可能是赋存于某一种或几种蛋白质中，试验显示，硒主要赋存于D组蛋白质中。图1大豆蛋白质在各组分中

8、的分布图2各组蛋白质中硒含量表1样品蛋白质的含量测定结果样品取样量/ml稀释倍数吸光度值工作曲线值/"g·ml-1蛋白质含量/mg·g-1A0.5100.20135.62567.34B0.5500.45882.666089.28C0.5250.46183.215143.68D0.5500.53095.8447100.64E0.5250.24944.411422.88注：表1中的数据为平