不同方法对旋毛虫传代效果影响的研究.pdf

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1、HeilongjiangAnimalScience74andVeterinaryMedicineNo092014不同方法时旋毛童传代效果影响的研究李沐森，呼显生，付连军，叶永铭，吴斌，姜成(吉林农业科技学院动物医学学院，吉林吉林132101)中图分类号：$852．731文献标识码：B文章编号：1004—7034(2014)09-0074—02关键词：肌旋毛虫；保种；传代；传代方法；传代效果摘要：为了为实现旋毛虫在保种、传代、维持生活循环等操作步骤上的标准化，保障所藏虫种生物性状的稳定性。通过用500蚴的肌旋毛虫感染小白鼠、大白鼠、家兔，与应用含青霉素、链霉素(各1000U／mL)和20％小

2、牛血清的Emtm培养液体外培养传代两种方法进行比较试验。结果表明：活体传代技术优于体外培养，说明应该使用小鼠与大鼠一起保种的原则。旋毛虫是分布最广、宿主最多的线虫，旋毛虫病2．1．1感染性肌旋毛虫收集将吉林农业科技学院(trichinenosis)是一种严重的人畜共患寄生虫病，重动物寄生虫实验室感染有肌旋毛虫小鼠，采用断颈椎症患者可因并发症而死亡，死亡率为3％～30％，对法处死，采集小鼠的膈肌、咬肌、股部肉样，撕去肌膜、人体健康造成严重的危害J。筋腱、脂肪，用绞肉机把肉磨碎后称25g置于600mL因为旋毛虫具有广泛的宿主范围和广阔的地理三角烧瓶中，倾入消化液(胰蛋白酶1．0g，0．5％盐酸

3、分布，宿主的差异影响感染性。为实现旋毛虫在保1000mE)在40℃培养箱中搅拌和消化15h，然后将种、传代、维持生活循环等操作步骤的标准化，保障所烧瓶移入冰箱中冷却。消化后的肉汤通过贝尔曼装藏虫种生物性状的稳定性，为科研、教学、生产提供标置滤过，过滤后再倒人冷水，静置2～3h后倾去上清准化的虫种资源，应对旋毛虫传代操作技术进行规液，滤液用37oC、0．85％的NaCl溶液洗涤，虫体沉淀范。笔者通过活体传代和体外培养传代两种方法进15～20min后倒去上清液，加入适量生理盐水沉淀洗行了研究，以确定更有效的传代方法。涤，重复3次，最后吸去上清液，回收杯底幼虫，镜下1材料观察活力并计数。取l0～

4、30mL沉淀物镜检J。1．1试验动物2．1．2试验动物感染与检查小白鼠、大白鼠、家兔试验动物由吉林正业生物有限公司动物繁育中接种前停饮2～3d，用胃管或者注射器经口分别接种心提供。昆明小鼠20只，平均体重为l8～22g，雌雄经消化法获得的旋毛虫幼虫500蚴，接种后在笼具中各半；家兔10只，体重为2—3kg，；大白鼠10只，雌饲养。每天观察接种动物状况，于感染50d后剖杀。雄各半，体重为150—200g。2．1．3试验动物感染状况检查每只动物按膈、头、1．2试验器械颈、胸、腹、背、前后肢5～6个部位取材，每部位又在鼠、兔饲养笼具，注射器，普通冰箱，医用低温冰不同处取3小块(约0．1g)肌肉组

5、织压片后用低倍箱，贝尔曼氏装置，眼科剪，眼科镊，载玻片，大平皿，镜检查囊包并计数。计数方法：观察10个视野下旋三角烧瓶，显微镜，60目筛胶头吸管，绞肉机，组织毛虫囊包平均数。以压片法检查幼虫感染状况。培养瓶，200目筛，离心管，CO培养箱，普通培养箱，2．2体外培养方法注射器。2．2．1旋毛虫成虫的收集每只成年大鼠经口灌1．3试验试剂胃5000条旋毛虫肌幼虫，感染6d后禁食1d，然后胃蛋白酶、盐酸、生理盐水，Emtm培养液。在乙醚麻醉下解剖大鼠，取出并纵行剖开小肠，再将2方法小肠剪成2—3cm的肠段，在无菌生理盐水中荡洗小2．1肌旋毛虫活体传代方法肠段3次，去除剩余的肠内容物。然后将小肠段

6、平铺于贝尔曼分离装置，加入37cC预温的生理盐水至刚好浸没小肠为宜，将其置于37℃培养箱中孵育4h。收稿日期：2014—01—04；修回日期：2014—01—28此期间成虫自肠壁钻出，进入生理盐水中。将含成虫基金项目：吉林农业科技学院重点学科资助项目(吉农院合字的孵育液用含青、链霉素(各1000U／mL)的无菌生[2013]第X024号)作者简介：李沐森(1970一)，男，高级实验师，硕士，研究方向理盐水洗涤2次，最后再用含青、链霉素(各为动物传染病，jllimusen@126．con．1000U／mL)和20％小牛血清的Emtm培养液洗涤《黑龙江畜牧兽医》综合版2014年O9月(下)75

7、1次，获得纯净的7日龄成虫，镜下观察活力并计以膈肌中荷虫密度最高，其余顺次为股腿肌、咬肌、腰数。肌、胸肌。2．2．2旋毛虫的体外培养在75mL组织培养瓶中3．2肌旋毛虫体外培养结果加入15mL含青、链霉素(各1000U／mL)和20％小成虫培养开始后72h，培养液中可见到少量的幼牛血清的Emtm培养液，每瓶移入成虫约4000条，然虫，但是活性极差，并且数量明显呈逐天减少趋势，培后平放于37℃、5％CO：的培养箱中培养24