SPE-HPLC法检测食品中多种痕量雌激素.pdf

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1、第42卷第1期江汉大学学报(自然科学版)Vo1．42NO．12014年2月J．JianghanUniv．(Nat．Sci．Ed．)Feb．2014SPE—HPLC法检测食品中多种痕量雌激素黄璐，张勇民，郑琦(江汉大学交叉学科研究院，湖北武汉430056)摘要：建立了固相萃取一高效液相色谱(SPE—HPLC)法同时测定食品中炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚、苯甲酸雌二醇残留量的方法。样品以乙腈超声萃取、离心，提取液经c固相萃取柱浓缩净化后，采用高效液相色谱仪进行分析。对固相萃取条件进行了优化，4种组分均得到了良好的分离，方法的检出限为6～12g／k只，加标回收率为80，3％～107．8％，

2、工作曲线的相关系数为0．9988～0．9998，相对标准偏差是0．124％～1．72％。结果表明，方法灵敏度高，分离效果好，样品处理简单、可减少杂质干扰，能够满足食品中雌激素分析的需要。关键词：固相萃取；高效液相色谱法；痕量雌激素；食品检测中图分类号：TS207．5；0657．7文献标志码：A文章编号：1673—0143(2014)01．0055-04近年来，雌激素残留污染问题已引起全世界1实验部分广泛关注，尤其是人工合成的雌激素具有强且持久的蛋白质同化作用，致使动物超常态生长，大1．1仪器与试剂幅度提高动物养殖经济效益n。当前，养殖业中1．1．1仪器DIONEX高效液相色谱仪(

3、配有雌激素的过量使用，导致食品中雌激素残留，进GP50型梯度泵，TCC一100柱温箱，UVD170U型人人体后扰乱体内激素平衡，影响生殖系统、神紫外检测器)，美国戴安公司；色谱柱：Thermo经系统，导致发育异常、性早熟等，甚至具有潜c18柱(250mmx0．46mln，5m)；旋转蒸发仪在致癌、致畸风险]。RE一52AA，上海亚荣生化仪器厂；KQ一250超声目前，对食品中的雌激素残留分析检测的方波提取仪，昆山市超声仪器有限公司；微孔滤膜法主要有色谱法、色谱一质谱联用、光谱法、(孔径0．45txm)；800型低速离心沉淀机，中国深免疫分析法等。雌激素在实际样品中的含量圳国华仪器；

4、DENVERinstrument电子天平；SPE很低且基质复杂，液液萃取等传统的提取方法虽装置(Supelco)；C。固相萃取柱(3mL，Supelco)。然成本低但操作复杂、富集倍数不够、有机溶剂1．1．2试剂对照品己烯雌酚(批号F1219049)、用量大，并且在提取过程中有机溶剂对样品中杂苯甲酸雌二醇(批号45131)购于阿拉丁试剂(上质成分的无区别提取常对目标物质的检测造成干海)有限公司，炔雌醇、壬基酚由德国进口；甲醇扰。近年来发展起来的固相萃取(Solidphaseex—(AR)、乙腈(AR、LC)、磷酸二氢钠(AR)均购于traction，SPE)采用固体物质作为萃取剂

5、，利用其国药集团化学试剂有限公司；实验用水为双蒸选择性吸附与洗脱的原理对样品进行富集、分离水。精密称取炔雌醇、已烯雌酚、壬基酚、苯甲和纯化，操作简单，富集倍数高，对环境污染小，酸雌二醇标准品各50m殳，用甲醇定容至50mL，能够得到较为纯净的待测物，减少了样品中复杂得到1mg／mL的贮备液，存放于冰箱备用，实验基质的干扰。笔者建立了SPE—HPLC联用的方时根据需要稀释至所需浓度。样品为超市购得的法，用SPE法对样品进行预处理，除去部分杂质奶粉、鲫鱼和鳊鱼。减少干扰，并经过一定的富集浓缩后以高效液相1．2色谱条件色谱(HPLC)再次检测，提高了灵敏度。流动相：乙腈一O．043mo

6、l／L磷酸二氢钠缓冲收稿日期：2013—02—01基金项目：湖北省科技厅项目(2011CDC130)；武汉市科技局项目(201220837304—3)作者简介：黄璐(1989一)，女，硕士生，研究方向：化学工程。通信作者：郑琦(1962一)，女，教授，研究方向：食品、药品分析化学。E-mail：zq_l101@sina．tom56江汉大学学报(自然科学版)总第42卷附，当超过一定体积后，萃取柱中大量的甲醇残留有可能改变萃取柱的极性，影响目标样品在萃取柱上的吸附。所以最终选择用12mL甲醇活化c固相萃取柱。2．1．2上样时溶液极性的选择将各组分标准混合样分别用20％、40％、60％

7、、80％和100％乙腈水溶液溶解，等体积浓度的溶液上样，按图1过程操作，收集上样后的流出溶剂，用液相色谱检测。检测结果显示40％、60％、80％和100％乙腈水溶液溶解的样品在上样后均能在吸附后的流出溶剂中检出部分目标物，说明样品并未完全吸附。20％乙腈水溶液溶解的样品在上样后的流出溶剂中未检出任何目标物，说明目标物几乎被完全吸附。所以选择上样溶液的溶剂为20％乙腈水溶液。2．1．3洗脱液的选择选择甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷为洗脱液，按图1过程操作，收集洗脱液，用HPLC检测，