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1、表达新型干扰素的CIK细胞对结肠癌的治疗作用陈艳刘辉于丽付玉华王敬晗钱其军[摘要]目的探讨细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）作为新型重组干扰素mix基因的载体治疗结肠癌的可行性。方法制备携带mix基因的腺病毒pDC359-mix+F35；分离培养CIK细胞；腺病毒Ad5-EGFP、Ad11-EGFP和Ad35-EGFP以感染复数(MOI)=100时感染CIK细胞24、48h后观察感染效率；腺病毒pDC359-mix+F35以MOI=0、1、10、100、1000感染CIK细胞2、4、6、8d，酶联免疫吸附试验(ELIS
2、A)检测上清中干扰素mix表达量；磺酰罗丹明B(SRB)显色法检测浓度为0.001、0.01、0.1、1、10μg/L的干扰素mix和干扰素α-2b对结肠癌细胞株HT29和SW480的抑制作用；乳酸脱氢酶释放法(LDH)检测效靶比为3∶1、10∶1的CIK和CIK-mix对HT29和SW480的杀伤作用。结果腺病毒pDC359-mix+F35成功制备，MOI=100，感染48h后对CIK细胞的感染效率可达80％以上；当MOI=100时，各时间段干扰素mix的表达量均达到（8.96±2.10）ng以上；当浓度为10μg/L
3、，干扰素mix对结肠癌细胞株抑制率分别为72.8％和70.1％，而干扰素α-2b分别为30.4％和28.6％；腺病毒pDC359-mix+F35感染CIK后，CIK-mix对HT29和SW480的杀伤作用均比CIK增强了20％以上。结论表达干扰素mix的CIK细胞体外能够发挥联合的抗肿瘤效应。新型重组干扰素mix；CIK细胞；腺病毒；结肠癌InhibitoryeffectofCIKwithneo-interferononcoloncancerCHENYanLIUHuiYULiFUYu-huaWANGJing-hanQIA
4、NQi-junEasternHepatobiliaryHospital,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200438,ChinaObjectiveToinvestigatethefeasibilityofusingcytokine-inducedkiller(CIK)cellsastargetedvectorstodeliverneo-interferon(mix)geneforcoloncancer.MethodsReplication-deficientadenovir
5、uspDC359-mix+F35carryingmixgenewasgenerated.CIKcellswereisolatedandcultured.TheinfectionefficiencyofAdS-EGFP,Ad11-EGFPandAd35-EGFPtoCIKfor24hand48hatMOI=100wasdeterminedbyfluorescencemicroscope.CIKcellswereinfectedbyadenoviruspDC359-mix+F35atMOI=0,1,10,100,1000fo
6、r2,4,6,8h,thenthemixconcentrationintheculturesupernatantofCIKcellswasdeterminedbyusingenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA).Theinhibitoryeffectofmixandinterferonα-2batdifferentconcentrationsof0.001,0.01,0.1,1,10μg/LoncoloncancercellsHT29andSW480wasdetectedbySulfo
7、rhodamineB(SRB).CytotoxicityofCIKandCIK-mixindifferentratioofefficiencytotarget3∶1and10∶1onHT29andSW480wastestedbyLDHreleasemethodinvitro.ResultsReplication-deficientadenoviruspDC359-mix+F35wassuccessfullygeneratedashighinfectionefficiencyas80％atMOI=100for48h.AtM
8、OI=100,themixconcentrationexceeded(8.96±2.10)nglevelatdifferentperiods.At10μg/L,theinhibitoryrateofinterferonα-2bandmixonHT29andSW480cellswas30.4％and28.6％,and7
