酶联免疫吸附试验(ELISA)基本原理与结果解释.doc

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1、酶联免疫吸附试验（ELISA）基本原理与结果解释基本原理：一、包被1、固相载体的要求（1）、结合抗体或抗原的容量大（2）、抗体或抗原牢固地固定在其表面（3）、不影响免疫反应性（4）、利于反应充分进行（5）、固相方法简便易行，快速经济2、固相载体的材料：聚笨乙烯3、包被coating将抗原或抗体结合于固相载体。4、封闭blocking用1%～5%的牛血清白蛋白或5%～20%小牛血清消除固相载体表面未结合的位点，消除非特异性吸附。二、反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体。标记酶的要求：(1)、活性高(2)、性

2、质稳定(3)、专一性强(4)、酶催化底物的显色信号易于判断和测量(5)、方法敏感，重复性好，简单易行(6)、酶的底物易于配制保存，酶及底物价廉常用酶辣根过氧化物酶HRP（ELISA中应用最为广泛的标记用酶）三、洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离。四、底物显色HRPDH2+H2O2—————→D+2H2OH2O2为受氢体，HRP对受氢体的专一性很高。供氢体DH2习惯上被称为底物，底物有多种。常用底物：四甲基联苯胺TMB四甲基联苯胺TMB是ELISA中应用最广泛的底物。TMB反应后显蓝色，加酸终止

3、反应后变为黄色,测定波长450nm，稳定，无致癌性。常用方法与原理一、双抗体夹心法方法：用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色应用：二价或二价以上的较大分子抗原测定乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等二、双抗原夹心法原理：类似双抗体夹心法操作步骤：类似双抗体夹心法应用：乙型肝炎表面抗体三、竞争法（测抗原）方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。应用：用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药物、激素等）四、竞争法（测抗体）原理：类似检测抗

4、原的竞争法应用：乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的检测五、间接法方法：用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标的抗人IgG（抗抗体或二抗）加底物显色。优点：一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。应用：常用于HCV抗体、HIV抗体和梅毒螺旋体抗体等的测定。六、捕获法方法：抗人IgMμ链抗体包被捕获待测标本中IgM类抗体→加入特异性抗原和酶标记特异性抗原的抗体底物→显色应用：病原体急性感染诊断中的IgM型抗体、甲型肝炎HAV-IgM抗体、乙型肝炎病毒核心HBc-IgM抗体常见

5、乙肝两对半结果解释结果模式HBsAg抗HBsHBeAg抗HBe抗HBc-Igm结果解释1阳性+阴性-阳性+阴性-阳性+俗称三大阳说明患者是慢性肝炎，有传染性。处于活动期2阳性+阴性-阴性-阴性-阳性+急性乙肝感染阶段或是慢性乙肝表面抗原携带者，传染性弱些3阳性+阴性-阴性-阳性+阳性+乙肝已趋向恢复，属于慢性携带者，传染性弱，长期持续此状态可转变为肝癌4阴性-阳性+阴性-阴性-阳性+既往感染过乙肝，现仍有免疫力，属于不典型恢复期。也可能为急性乙肝感染期5阴性阴性阴性阳性阳性---++既往有乙肝感染，属于急性

6、感染恢复期，少数人仍有传染性6阴性-阴性-阴性-阴性-阳性+过去有乙肝感染或现在正处于急性感染7阴性-阳性+阴性-阴性-阴性-以前打过乙肝疫苗或以前感染过乙肝8阴性-阳性+阴性-阳性+阳性+急性乙肝恢复期，以前惑染过乙肝9阳性+阴性-阴性-阴性-阴性-急性感染早期或者慢性乙肝表面抗原携带都传染性弱。10阳性+阴性-阴性-阳性+阴性-慢性乙肝表面抗原携带者易转阴或者是急性感染趋向恢复11阳性+阴性-阳性+阴性-阴性-早期乙肝惑染或者慢性携带者，传染性强12阳性+阴性-阳性+阳性+阳性+急性乙肝感染趋向恢复。或

7、者为慢性携带者