实验一:检测生物组织中的糖类-脂肪-蛋白质.doc

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1、实验检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质一、实验原理:某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物,产生特定的颜色反应。50~65℃水浴颜色反应:还原糖+斐林试剂砖红色沉淀淀粉+碘液蓝色脂肪+苏丹Ⅲ/Ⅳ橘黄色/红色蛋白质+双缩脲试剂紫色络合物二、实验步骤:待测样液2ml斐林1ml(甲液和乙液混合)50~65℃水浴加热3min观察1、检测还原糖2、花生子叶薄片1片染色2min(苏丹Ⅲ染液)洗浮色(50%酒精)观察检测脂肪3、检测蛋白质待测样液2ml双缩脲A液1ml双缩脲B液4滴观察待测样液2ml碘液2滴观察4、检测淀粉注意事项:还原糖的检测和观察: ①还原糖有葡萄糖,果糖,麦芽糖;②甲

2、乙液必须等量混合均匀后再加入样液中,现配现用;③必须用水浴加热脂肪的鉴定:①切片要薄,如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰,有的地方模糊。 ②酒精的作用是:洗去浮色 ③需使用显微镜观察 ④使用不同的染色剂染色时间不同蛋白质的鉴定:①先加A液1ml,再加B液4滴②鉴定前,留出一部分组织样液,以便对比加热资料一:生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多,有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基,因此叫做还原糖;蔗糖分子内没有,为非还原糖。可溶性还原糖(如葡萄糖、果糖、麦芽糖)与斐林试剂发生作用,可生成砖红色的Cu2O沉淀。如:葡萄糖+2Cu2++4OH

3、—  葡萄糖酸+Cu2O↓(砖红色)+H2O即Cu2+被还原成Cu2O,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。用斐林试剂鉴定还原糖时,溶液变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色沉淀淀粉遇碘变蓝色(直链)或紫(红)色(支链)。资料二:脂肪和类脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分,脂类的主要功能是氧化供能。脂肪主要存积于脂肪组织中,并以油滴状的微粒存在脂肪细胞内。苏丹三染液其实是苏丹三固体颗粒溶于高浓度乙醇(70%-95%,多用95%)配制而成的,而脂肪同样较易溶于高浓度乙醇,所以染色时间长了就会让样品中的脂肪溶解,洗浮色的时候被洗掉,就观察不到了。在病理检验中,脂类染色法最

4、常用以证明脂肪变性,脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料,最常用的有苏丹Ⅲ,苏丹Ⅳ,苏丹黑及油红O等。脂肪被染色,实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。临床上常对组织切片进行染色观察。资料三:蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应。(蛋白质分子中含有很多肽键,在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用,产生紫色反应。)资料四:在实验中液体的材料可以直接利用,而有些固体的材料需经过处理后才能用于实验。如苹果、萝卜、梨、西瓜等可以支撑匀浆过滤后利用。一种检测脂肪的方法:取少量生物组织,制成临时装片,用苏丹Ⅲ后者苏丹Ⅳ染色后,用50%酒精洗去浮

5、色,在高倍显微镜下观察。这样即使生物组织中脂肪含量少,显色不明显也能观察到。

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