c7orf69基因的克隆表达及生物信息学分析

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1、16·论著·《中国肝脏病杂志(电子版)》2013年第5卷第4期C7orf69基因的克隆表达及生物信息学分析顾红岩，孟雪，李辉，郝晓花¨，李兴旺，魏红山(1．北京大学地坛医院教学医院，北京100015；2．首都医科大学附属北京地坛医院感染中心，北京100015；3．首都医科大学附属北京地坛医院传染病研究所，北京100015；4．新发突发传染病研究北京市重点实验室，北京100015)摘要：目的体外克隆表达并纯化C7orf69重组蛋白，对C7orf69蛋白进行生物信息学分析。方法PCR扩增C7orf69目的基因片段，构建原

2、核表达载体，转化BL21，IPTG诱导目的蛋白表达，SDS—PAGE$IWesternblot鉴定，Ni-NTA纯化目的蛋白。结果扩增获得序列完全正确的C7orf69基因片段(自然变异体)，重组蛋白以包涵体的形式高效表达，在非变性条件下获得较高纯度的重组蛋白。生物信息学软件预~IC7orf69蛋白(含信号肽)含有PKC、CK2磷酸化位点和N．十四烷基化位点。结论成功的对分泌蛋白C7orf69进行了基因克隆、表达与初步纯化，为其进一步的功能研究奠定了坚实的基础。关键词：C7orf69；基因；分泌蛋白Cloning，ex

3、pressionandbioinformaticsanalysisofgeneC7orf69GUHong-yan，MENGXue，LIHui，HAOXiao-huaLIXing—wang，WEIHong-shan，，．BeijingDitanHospitalPekingUniversityTeachingHospitalBeijing100015,China；2．InfectiousDiseasesCenter,BeijingDitanHospitalCapitalMedicalUniversity,Beijing1

4、00015,China,"3．InstituteofInfectiousDiseases，BeijingDitanHospitalCapitalMedicalUniversity,Beijing100015，China,"．BeijingKeyLaboratoryofEmergingInfectiousDiseases，Beijing100015,China)Abstract：0bjecfiveToclone，expressandpunfyrecombinantproteinC7orf69invitro，andtoa

5、nalyzeitsbioinformaticsbypredictionsoftware．MethodsGeneC7orf69wasamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)andinsertedintoprokaryoticexpressionplasmid．ThentheplasmidwastransformedintoE．coliBL21，inducedbyIPTG，identifiedbySDS-PAGEandWesternblot，andpurifiedundernativ

6、eordenaturingconditionsbyNi—NTAresin．ResultsTherightsequencedgeneC7orf69cotaininganaturalvariationwasobtained，andtherecombinantproteinwashighlyexpressedintheformofinclusionbody．PurifiedrecombinatproteinwasobtainedundernativeconditionsbyNi-NTAresin．Thebioinforma

7、ticsanalysisbypredictionsoftwareindicatesthattherearePKCandCK2phosphorylationsitesandamyristylationsiteintheproteinC7orf69includingthesignalpeptide．ConclusionsC7orf69wassuccessfullycloned，expressedandpurified．Thesejobslaysolidfoundationforthefurtherstudyofitsfu

8、nctions．Keywords：C7orf69；Gene；Secretoryprotein分泌蛋白(secretedprotein)是指在细胞内合蛋白质组的30％t，参与了信号转导、细胞黏附、成后，分泌到细胞外发挥重要作用的生物活性分迁移、增殖分化、血液凝固、免疫预防和癌症发生子，包括各种不同功能的分子如细胞因子、趋化因等多种过程。许多分泌蛋