高效液相色谱-质谱联用技术在海洋药用生物化学成分快速鉴别中的应用

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1、中国海洋大学学报第4o卷第5期40(5)：099～1022010年5月PERIODICALOFOCEANUNIVERSITYOFCHINAMay，2010高效液相色谱一质谱联用技术在海洋药用生物化学成分快速鉴别中的应用张道来，陈军辉，周明，黎先春，王小如(1．国家海洋局第一海洋研究所，海洋生态研究中心，山东青岛266061；2．厦门大学化学化工学院化学系，福建厦门361005)摘要：高效液相色谱质谱联用(HPIC-MS)技术，将HPLC的高分离效能与MS的强大结构鉴定功能结合起来，已逐渐成为天然产物化学成分快速分离、鉴别的强有力手段。本研究采用高效液相色谱

2、一电喷雾质谱联用(HPLC-ESI—MS)技术，成功建立了刺参皂苷快速鉴别方法，并对市售干刺参中的4种皂苷进行了鉴别。此外，应用该技术对罗氏海盘车中的13种化学成分进行了快速鉴别。为海洋药用生物化学成分快速鉴别提供了1种值得推广的新方法，为更好的开发利用海洋天然药物奠定了基础。关键词：高效液相色谱一质谱联用；海洋药用生物；快速鉴别中图法分类号：P714．5；R914文献标志码：A文章编号：16725174(2010)05—099—04高效液相色谱与质谱联用技术是新发展起来的重声波仪(中国昆山市超声仪器有限公司)；Milli—Q(18．2要快速分离和鉴定分析

3、方法之一，该技术将液相色谱MQ)超纯水处理系统(美国Millipore公司)；Z383K高效的在线分离能力与质谱高选择性、高灵敏度的检型离心机(德国HERMLE公司)，THZ-8恒温水浴锅测能力相结合，可以同时得到化合物的保留时间、在线(中国浙江嘉兴电热仪器厂)。甲醇、乙腈、乙酸等试剂紫外光谱、分子量及特征结构碎片等丰富的信息，是复均为色谱纯(德国Merck公司)，其它试剂均为国产分杂体系分离分析最有力的研究手段l1]。不仅可以避析纯；水为自制MilliQ超纯水。免复杂、繁琐、耗时的分离纯化工作，而且能分离鉴定1．2样品制备以往难于辨识的痕量活性物质。目前

4、，液质联用技术刺参样品制备：称取5．0g刺参干粉样品，置于在陆源天然产物质量控制及化学成分研究中已得到广200mL圆底烧瓶中，加人体积分数为859／6的乙醇水溶泛应用[4]，而对海洋药用生物中化学成分进行快速鉴液120mL，70℃水浴提取48h，静置、离心，取上清液定研究的很少。蒸至粘稠状，适量水溶解，分别用石油醚、正丁醇萃取，近年来，已有学者指出建立快速分离和鉴定系统正丁醇相过0．45m滤膜后作为供试品溶液。是开发海洋药物和快速发现药物先导化合物的关键瓶罗氏海盘车样品制备：称取2．0g罗氏海盘车干粉颈[5]，但国内外学者对海洋药物的研究主要集中在对样品，

5、置于100mL具塞锥形瓶中，加入20甲醇水溶海洋药用生物中新化合物分离鉴定及药理活性试验研究上Ⅲ6]，而应用HPLC-MS对海洋药用生物中化合物液50mL，超声提取30min，静置、离心，取上清液，过进行快速鉴定研究的很少。本实验室利用HPIC-MS0．45／,m滤膜后作为供试品溶液。联用技术对刺参、罗氏海盘车等传统海洋药用生物化1．3色谱条件学成分进行了系列的研究，本文就以刺参和罗氏海盘刺参色谱条件：美国AgilenteclipseXDB-C18车为例进行介绍。(4．6minx15mm)色谱柱；以甲醇和水(体积分数为60：40)为流动相；进样量为40L，

6、流速0．8mL／min，1材料与方法室温，检测波长为UV254nm，淋洗时间为70min。罗氏海盘车色谱条件：美国AgilentZorbaxBo-1．1仪器与试剂nus—RPC18色谱柱(4．6mmX250mm，5,urn)串联迪马1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，配有二极管阵列检测器(DAD)，四元泵，柱温箱，自动进DiamonsilCl8色谱柱(4．6mm×150mm，5um)，流动样器等；XCT6320型离子阱质谱仪，配有电喷雾离子相为0．2(体积分数)冰乙酸水溶液(A)和色谱纯甲源(美国Agilent公司)；KQ-400KDE型高

7、功率数控超醇(B)，进样量为20uL，流速0．8mL／min，室温，检测*基金项目：国家自然科学基金项目(20675021，20905017)；中国近海海洋综合调查与评价908专项(908—0205—04)；海洋局青年基金资助收稿日期：20091210；修订日期：2010—01一O4作者简介：张道来(1984)，男，硕士。E-mail：zhangdaolai@fio．org．cn*通讯作者：E—mail：jhchen@fio．org．cni00中国海洋大学学报波长260nm，淋洗时间为60rain，梯度洗脱程序time：按1．2处理方法将其制备成供试品溶液

8、，按1．3、O一10—2O一3O一4O～5O一60rainB(体积